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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 第一次做电泳！请问做电泳前的蛋白怎么提取，怎么处理，处理完后-20度保存可以吗？
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紫薇花开

新虫 (正式写手)

[交流] 第一次做电泳！请问做电泳前的蛋白怎么提取，怎么处理，处理完后-20度保存可以吗？ 已有2人参与

第一次做电泳，向各位高手请教，做电泳前的蛋白要怎么提取，怎么处理，怎么保存，如果保存的话，-20度可以吗？最好详细点！！谢谢各位了！
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1楼 2011-10-11 13:44:05
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Rubisco580

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-10-23 12:13:32
adslye(金币+2): 鼓励交流！祝顺利！ 2011-10-23 15:08:14
引用回帖:
1楼: Originally posted by 紫薇花开 at 2011-10-11 13:44:05:
第一次做电泳，向各位高手请教，做电泳前的蛋白要怎么提取，怎么处理，怎么保存，如果保存的话，-20度可以吗？最好详细点！！谢谢各位了！

楼主这个问题能写出篇综述来……
简单的说，需要合适的缓冲体系、合适的盐离子浓度，再根据不同的需求，使用不同的变性剂和去垢剂。楼主告知详细的电泳需求和实验目的，才方面我们给你建议。蛋白保存的话，4度最多一夜，－20度一周，长期保存－80度。
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3楼2011-10-20 16:32:41
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lxy19870124

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
问题太宽泛了，小一点好回答。
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遇到问题，解决问题。
2楼2011-10-20 10:03:19
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紫薇花开

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Rubisco580 at 2011-10-20 16:32:41:
楼主这个问题能写出篇综述来……
简单的说，需要合适的缓冲体系、合适的盐离子浓度，再根据不同的需求，使用不同的变性剂和去垢剂。楼主告知详细的电泳需求和实验目的，才方面我们给你建议。蛋白保存的话，4度最 ...

我想测我体外培养细胞周期蛋白D1在细胞内的表达量，就是将培养一段时间之后的细胞裂解后，然后电泳后测蛋白的表达量！
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4楼2011-10-23 11:06:13
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Rubisco580

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 紫薇花开 at 2011-10-23 11:06:13:
我想测我体外培养细胞周期蛋白D1在细胞内的表达量，就是将培养一段时间之后的细胞裂解后，然后电泳后测蛋白的表达量！

是要做western吗？那可以考虑购买现成的细胞裂解液，我记得生工的RIPA裂解液就可以（应该是这个名字吧）。
按照说明书操作，蛋白最好保存在－80度。一般步骤就是收集细胞，PBS洗涤1～3次，裂解，离心收取上清。说明书说的很明白的。
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5楼2011-10-24 16:46:27
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