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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒量少
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yitonghui

木虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒量少

我在DH5a菌中以PET28b(+)为载体，构建重组质粒，插入基因片段为一细胞毒性蛋白基因。转化实验完毕后我挑了8个克隆进行震荡培养，发现得到质粒的量很少，跟MARKER条带的量差不多。在震荡培养时，我参考别人建议，怕胰化蛋白胨中的微量乳糖诱导蛋白表达，在LB培养基里加了0.5%的葡萄糖，不知道是不是这个原因反倒影响了质粒的量？我是用试剂盒提的质粒，这个盒子提别的质粒量都不错。
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1楼2011-10-07 21:43:51
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

【答案】应助回帖

yitonghui(金币+2): 2011-10-07 23:17:21
貌似pet28系列的采用的都是T7-lac启动子耶。这个在DH5a里面是无法表达的吧。另外你加葡萄糖肯定会降低细菌cAMP的浓度，要知道cAMP可是很多蛋白表达的调控分子，所以我认为你这个加葡萄糖很有可能会有影响。建议你做对照看看。
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可以用QQ找我……
4楼2011-10-07 22:59:04
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

yitonghui(金币+1): 2011-10-07 22:06:57
应该不会吧，质粒量少的缘故是不是菌量太少了？
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显微镜下的世界很精彩！
2楼2011-10-07 21:57:03
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

yitonghui(金币+1): 2011-10-07 22:06:50
你富集一下菌体试试呗，譬如连续富集5ml的菌液再提质粒
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显微镜下的世界很精彩！
3楼2011-10-07 21:58:12
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