| 查看: 1022 | 回复: 6 | |||
暗夜懒猫银虫 (小有名气)
|
[求助]
载体构建成功下一步遇难
|
| 好不容易构建成功了一个载体，在把提取的质粒导入表达受体细胞，涂卡那抗性的板长出菌落，但挑取菌落用液体培养基培养，做菌液PCR检测目的基因条带时，却没有条带出现。请问各位高手这是怎么回事？是质粒没导进去？还是质粒丢失了呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有69人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如何将miRNA构建到慢病毒载体
已经有8人回复
- 关于SiRNA表达载体构建的问题
已经有9人回复
- 表达载体的构建
已经有17人回复
- 表达载体构建的相关问题
已经有15人回复
- 【求助/交流】求构载体高手 赐教构建亚细胞定位载体pCAMBIA1302
已经有4人回复
- 【求助/交流】启动子缺失载体的构建
已经有6人回复
- 【求助/交流】同尾酶构建载体问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】连T载体后，转化不成功！请各位同仁帮忙分析下！有图有数据
已经有35人回复
- 【求助/交流】表达载体构建不成功的原因
已经有27人回复
- 急求：构建载体时引物设计的问题
已经有7人回复
2楼2011-10-04 19:32:42
红多多
木虫 (正式写手)
版筑饭牛的日子
- MolEPI: 12
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2295.5
- 红花: 7
- 帖子: 340
- 在线: 22.3小时
- 虫号: 303085
- 注册: 2006-12-03
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励应助！ 2011-10-05 17:36:12
wanhscn(金币+3): 鼓励应助！ 2011-10-05 17:36:12
|
呵呵，你是不是用的PET载体啊 1.看清楚你用的感受态细胞能不能接受这类的的载体哦，Origami™ B系列的菌对kan是不敏感的，如果你实在需要保证蛋白二硫键的形成，可以考虑换成Origami™ 2系列的感受态。 2.如果你确定了不是宿主菌和载体匹配性问题，那么很可能是载体丢失了，你摇菌的时候加入了kan没，如果没加，问题大概就出这里了。 3.你挑取的菌落应该做一个菌落PCR，确保不做无用功，因为单靠抗生素筛选，貌似假阳性很高的耶。 我最近也在做表达，多多交流 嘿嘿 |
3楼2011-10-04 22:42:03
暗夜懒猫
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1038.2
- 散金: 14
- 红花: 2
- 帖子: 191
- 在线: 54小时
- 虫号: 821908
- 注册: 2009-08-04
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2011-10-05 08:26:39
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16334.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3653
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
5楼2011-10-05 09:32:28
暗夜懒猫
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1038.2
- 散金: 14
- 红花: 2
- 帖子: 191
- 在线: 54小时
- 虫号: 821908
- 注册: 2009-08-04
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2011-10-05 10:40:18
红多多
木虫 (正式写手)
版筑饭牛的日子
- MolEPI: 12
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2295.5
- 红花: 7
- 帖子: 340
- 在线: 22.3小时
- 虫号: 303085
- 注册: 2006-12-03
- 专业: 生物化学
7楼2011-10-05 10:53:22
100