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暗夜懒猫银虫 (小有名气)
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[求助]
载体构建成功下一步遇难
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| 好不容易构建成功了一个载体，在把提取的质粒导入表达受体细胞，涂卡那抗性的板长出菌落，但挑取菌落用液体培养基培养，做菌液PCR检测目的基因条带时，却没有条带出现。请问各位高手这是怎么回事？是质粒没导进去？还是质粒丢失了呢？ |
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暗夜懒猫
银虫 (小有名气)
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4楼2011-10-05 08:26:39
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【答案】应助回帖
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wanhscn(金币+3): 鼓励应助！ 2011-10-05 17:36:12
wanhscn(金币+3): 鼓励应助！ 2011-10-05 17:36:12
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呵呵，你是不是用的PET载体啊 1.看清楚你用的感受态细胞能不能接受这类的的载体哦，Origami™ B系列的菌对kan是不敏感的，如果你实在需要保证蛋白二硫键的形成，可以考虑换成Origami™ 2系列的感受态。 2.如果你确定了不是宿主菌和载体匹配性问题，那么很可能是载体丢失了，你摇菌的时候加入了kan没，如果没加，问题大概就出这里了。 3.你挑取的菌落应该做一个菌落PCR，确保不做无用功，因为单靠抗生素筛选，貌似假阳性很高的耶。 我最近也在做表达，多多交流 嘿嘿 |
3楼2011-10-04 22:42:03
天使托
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T.Shen
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5楼2011-10-05 09:32:28
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