| 查看: 2215 | 回复: 8 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
[求助]
如何将miRNA构建到慢病毒载体
|
||||
| 如何将miRNA构建到慢病毒载体？以前只做过将基因构建到质粒载体，两者有什么区别？最好有具体的实验步骤，或相关资料，不胜感激！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 实用的资源 | 【分子生物】EPI帖 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
wanpeng» 猜你喜欢
哪家公司提供蛋白质组学前处理磁珠？
已经有10人回复
-
【加州大学戴维斯分校】合成生物学课题组招聘【博士】/【博士后】
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有287人回复
-
EDC与NHS酰胺化反应求助
已经有3人回复
-
德国atech陶瓷膜1KD和5KD在木质素中的应用
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 震撼！植物可以通过MiRNA调控动物（zz 南方周末）
已经有50人回复
- 复杂疾病关联的miRNA-mRNA功能模块识别的信息融合方法研究
已经有8人回复
- 世界级美女科学家Nature文章解析miRNA----ebio
已经有19人回复
- miRNA质粒转染
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于慢病毒载体
已经有14人回复
- 【分享】连接miRNA到胚胎干细胞的核心转录调控环
已经有4人回复
- 【资源】miRNA-96在胰腺癌中可作为一种肿瘤抑制基因抑制KRAS
已经有4人回复
cdl007
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 41
- 应助: 46 (小学生)
- 贵宾: 0.025
- 金币: 2570.6
- 红花: 11
- 帖子: 545
- 在线: 123.1小时
- 虫号: 275133
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 肿瘤病因
【答案】应助回帖
★ ★ ★
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good 2011-09-04 18:56:06
tutufei(金币+5): 多谢 2011-09-08 16:21:30
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good 2011-09-04 18:56:06
tutufei(金币+5): 多谢 2011-09-08 16:21:30
|
一个说明书上的内容，相当简单好理解 慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例)： 第一天： 1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天： 1.转染293FT细胞。 1. 500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G 2. 500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000 3. 5min后，将，溶液混合，室温静止30min 4. 从6孔板中吸出1ml培养基，然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物。 2. 6-10h后，移除含有DNA-脂质体复合物的培养基，代之以正常培养液DMED+ 10%FBS（从此刻开始算时间）。 第三天： 3.转染24h后，荧光显微镜下观察，转染效率应达到70%以上 第四天： 4. 48h收获含病毒的上清，0.45um滤膜过滤， 同时再往6孔板中加入2ml完全培养基 4. 感染细胞：用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞。 第五天： 5. 72h后再次收获病毒上清。将昨天感染的细胞离心去除上清，然后再次感染目的细胞。 6. 一般感染48h后，就能见到明显的荧光。 |
2楼2011-09-04 18:41:16
cdl007
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 41
- 应助: 46 (小学生)
- 贵宾: 0.025
- 金币: 2570.6
- 红花: 11
- 帖子: 545
- 在线: 123.1小时
- 虫号: 275133
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 肿瘤病因
【答案】应助回帖
★ ★
dhd997(金币+2): 专家就是专家 2011-09-09 07:46:49
dhd997(金币+2): 专家就是专家 2011-09-09 07:46:49
|
http://www.stemcell8.cn/forum-viewthread-tid-41159-highlight.html 这个网址上的更详细，，俺倒是想做，可惜实验室条件不够。。。。。 |
3楼2011-09-04 18:59:41
l-c-l
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 2434.4
- 红花: 10
- 帖子: 773
- 在线: 130.8小时
- 虫号: 1311363
- 注册: 2011-05-31
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤免疫
4楼2011-09-07 15:46:55
5楼2011-09-08 14:44:54
l-c-l
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 2434.4
- 红花: 10
- 帖子: 773
- 在线: 130.8小时
- 虫号: 1311363
- 注册: 2011-05-31
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤免疫
6楼2011-09-09 07:35:28
7楼2012-02-21 15:28:23
8楼2012-09-07 10:05:18
jinanfendou
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 19
- 帖子: 15
- 在线: 8.8小时
- 虫号: 2064805
- 注册: 2012-10-16
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
9楼2012-11-06 14:04:10
5