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tutufei

铜虫 (小有名气)

[求助] 如何将miRNA构建到慢病毒载体

如何将miRNA构建到慢病毒载体?以前只做过将基因构建到质粒载体,两者有什么区别?最好有具体的实验步骤,或相关资料,不胜感激!
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l-c-l

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-09-07 17:17:21
慢病毒构建实验条件要求并不高,只要能弄到所需的载体就比较简单了。载体构建部分就是常规的分子生物学技术,最主要是看包装效率,要求较高的就是氯化钙了,基本用进口的高纯才可以(当然不选用该系统不作考虑)。若是包装效率好的话,得到的毒液滴度也是足够感染Jurkat等难以转染的白血病等细胞株,此时可以不经过浓缩,因为浓缩需要超高速离心(8万),这个还是比较难办的。
4楼2011-09-07 15:46:55
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l-c-l

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-09 07:47:00
tutufei(金币+5): 谢谢,明白了 2011-09-09 19:42:26
载体是双链,一般合成小分子RNA(mirna或shRNA等),经退火形成双链DNA结构,即可进行连接。
6楼2011-09-09 07:35:28
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