应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何将miRNA构建到慢病毒载体
51/1返回列表
查看: 2696  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tutufei

铜虫 (小有名气)

[求助] 如何将miRNA构建到慢病毒载体

如何将miRNA构建到慢病毒载体？以前只做过将基因构建到质粒载体，两者有什么区别？最好有具体的实验步骤，或相关资料，不胜感激！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实用的资源 【分子生物】EPI帖

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wanpeng

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-09-04 16:54:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanpeng

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
你们一般在哪个公司做?我们公司一般都是在比昂做，这个公司售后的服务还是不错的。
赞一下 回复此楼
8楼2012-09-07 10:05:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good 2011-09-04 18:56:06
tutufei(金币+5): 多谢 2011-09-08 16:21:30
一个说明书上的内容，相当简单好理解


慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例)：

第一天：
1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度
第二天：                       
1.转染293FT细胞。
  1. 500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
  2. 500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000
  3. 5min后，将，溶液混合，室温静止30min       
  4. 从6孔板中吸出1ml培养基，然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物。
2. 6-10h后，移除含有DNA-脂质体复合物的培养基，代之以正常培养液DMED+   
   10%FBS（从此刻开始算时间）。
第三天：
3.转染24h后，荧光显微镜下观察，转染效率应达到70%以上
第四天：
4. 48h收获含病毒的上清，0.45um滤膜过滤， 同时再往6孔板中加入2ml完全培养基
4. 感染细胞：用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞。
第五天：
5. 72h后再次收获病毒上清。将昨天感染的细胞离心去除上清，然后再次感染目的细胞。
6. 一般感染48h后，就能见到明显的荧光。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-09-04 18:41:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 专家就是专家 2011-09-09 07:46:49
http://www.stemcell8.cn/forum-viewthread-tid-41159-highlight.html

这个网址上的更详细，，俺倒是想做，可惜实验室条件不够。。。。。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-09-04 18:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l-c-l

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-09-07 17:17:21
慢病毒构建实验条件要求并不高，只要能弄到所需的载体就比较简单了。载体构建部分就是常规的分子生物学技术，最主要是看包装效率，要求较高的就是氯化钙了，基本用进口的高纯才可以（当然不选用该系统不作考虑）。若是包装效率好的话，得到的毒液滴度也是足够感染Jurkat等难以转染的白血病等细胞株，此时可以不经过浓缩，因为浓缩需要超高速离心（8万），这个还是比较难办的。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-09-07 15:46:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +6 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-21 17:21 by 学员8dgXkO
[考研] 333求调剂 +4 87639 2026-03-21 4/200 2026-03-21 17:18 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-21 3/150 2026-03-21 16:37 by macy2011
[考研] 求助 +4 梦里的无言 2026-03-21 5/250 2026-03-21 15:53 by ColorlessPI
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 11/550 2026-03-21 15:43 by ColorlessPI
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +8 枫桥ZL 2026-03-18 10/500 2026-03-21 15:29 by Shawn0911
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 梁梁校校 2026-03-17 9/450 2026-03-21 02:17 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 350求调剂 +5 weudhdk 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:04 by luoyongfeng
[考研] 一志愿北京化工大学0703化学318分，有科研经历，求调剂 +4 一瓶苯甲酸 2026-03-14 4/200 2026-03-20 20:36 by fen_rao
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭