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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体构建成功下一步遇难
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

[求助] 载体构建成功下一步遇难

好不容易构建成功了一个载体，在把提取的质粒导入表达受体细胞，涂卡那抗性的板长出菌落，但挑取菌落用液体培养基培养，做菌液PCR检测目的基因条带时，却没有条带出现。请问各位高手这是怎么回事？是质粒没导进去？还是质粒丢失了呢？
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1楼 2011-10-04 16:46:03
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 红多多 at 2011-10-04 22:42:03:
呵呵，你是不是用的PET载体啊
1.看清楚你用的感受态细胞能不能接受这类的的载体哦，Origami™ B系列的菌对kan是不敏感的，如果你实在需要保证蛋白二硫键的形成，可以考虑换成Origami™ 2系列的感受态。 ...

我选用的是PET28a载体，受体细胞是大肠杆菌BL21（DE）,见有文献是这么用的，不知道用在我这里适不适合。 什么抗性不是针对载体来说的吗，载体是kan抗性的，那么菌体不应该抗kan吗？ 是这样吗？ 请多指教！
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4楼2011-10-05 08:26:39
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 天使托 at 2011-10-05 09:32:28:
这种情况太正常了，有可能是你没有连接成功！
做一个PCR验证就行了。。。如果不对继续做。。。

验证过连接成功了，才提前质粒导入到表达受体细胞中啊。
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6楼2011-10-05 10:40:18
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