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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于真菌发酵结球问题
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于真菌发酵结球问题

我做的白腐真菌发酵产酶实验，500ml摇瓶培养，以前在往复式摇床上，菌丝长成很多小球，生长良好；现在往复式摇床报废了，换了一台旋转式摇床，菌丝不是长成很多小球，而是长成一个大团块，请问这是什么原因？该怎么解决，才能达到往复式摇床上的效果？ 我想过使用带挡板的三角瓶或加玻璃珠。不知各位有没有遇到过类似问题，怎么解决的？
我的菌种都不产孢子，是挑取斜面或平板上的菌丝块接种的。

[ Last edited by amq7392 on 2011-9-28 at 17:12 ]
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1楼 2011-09-28 17:11:37
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jiasanlin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助。 2011-09-28 19:27:14
我们实验室都是用旋转摇床培养真菌的，基本上菌丝球生长都挺好的。你现在的情况有几种怀疑：
1. 摇床的转速不够
2. 培养基装液量偏大
3. 其它培养条件与复式摇床有差别，例如：温度 通气量等是不是没有控制好。
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2楼2011-09-28 17:45:14
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jiasanlin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助。 2011-09-28 19:27:22
条件应该没有问题呀，我们做黑曲霉时一般用孢子接。你可以考虑将少量菌丝块先放到含1ml培养基的2ml 离心管中，用混匀器多涡旋几次把打打散然后再去接种。

有时为了增加菌丝球数量，我们在培养基中加入极少少量的麸皮之类的小颗粒，培养后菌体就以麸皮为核心开始生长，你的白腐菌应该也可以直接利用麸皮吧。
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4楼2011-09-28 18:55:20
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiasanlin at 2011-09-28 17:45:14:
我们实验室都是用旋转摇床培养真菌的，基本上菌丝球生长都挺好的。你现在的情况有几种怀疑：
1. 摇床的转速不够
2. 培养基装液量偏大
3. 其它培养条件与复式摇床有差别，例如：温度 通气量等是不是没有控制好。

谢谢您的回复。针对您的3个怀疑，我分别回答一下：
1.摇床转速200转/min
2.500ml三角瓶装了80ml培养液
3.温度、装液量与往复式摇床一致，瓶塞都是用的棉塞。
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3楼2011-09-28 18:13:43
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HarveyWang

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海外行者

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5, MicEPI+1): 鼓励应助。 2011-09-28 19:27:29
amq7392(金币+5): 2011-10-04 19:40:46
引用回帖:
1楼: Originally posted by amq7392 at 2011-09-28 17:11:37:
我做的白腐真菌发酵产酶实验，500ml摇瓶培养，以前在往复式摇床上，菌丝长成很多小球，生长良好；现在往复式摇床报废了，换了一台旋转式摇床，菌丝不是长成很多小球，而是长成一个大团块，请问这是什么原 ...

挡板 可以将菌丝球变小的。但也会产生大量泡沫。 只要你不介意。

玻璃珠也可以。
记得别放多了，多于10个，那就成了研磨细胞了。
建议放1、2、3、4、5个试试，用含有菌丝球的发酵液摇上一天，就看出效果了。
然后决定用几个玻璃球。 （我说的玻璃球直径约4-6 mm）。
玻璃球用多少合适------和摇瓶大小和摇床转速有关。

还有一种方法，跟放挡板差不多。就是放一圈钢丝圈。钢丝圈是稀疏的一圈圈的，可以破坏大的菌丝球。
钢丝圈 螺旋直径大约为1cm，螺距大约为0.4-0.6cm，钢丝直径1-2mm。
螺距过小的话，起不到打碎菌丝球的作用。

还有最简陋的最后一种办法：在摇瓶内放一个钢制的钥匙圈。呵呵。。。一个足矣。而且也很便宜。。。。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2011-09-28 19:02:41
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by HarveyWang at 2011-09-28 19:02:41:
挡板 可以将菌丝球变小的。但也会产生大量泡沫。 只要你不介意。

玻璃珠也可以。
记得别放多了，多于10个，那就成了研磨细胞了。
建议放1、2、3、4、5个试试，用含有菌丝球的发酵液摇上一天，就看出效果了。 ...

谢谢！不知道菌丝球大小和溶氧量有没有关系，我都是用棉塞做瓶塞的，据说棉塞通气不好。另外，往复式摇床之所以效果好，是因为通气效果好，还是因为往复式振荡造成的培养液和瓶壁的撞击作用呢？
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6楼2011-09-28 21:22:02
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microxy

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by amq7392 at 2011-09-28 21:22:02:
谢谢！不知道菌丝球大小和溶氧量有没有关系，我都是用棉塞做瓶塞的，据说棉塞通气不好。另外，往复式摇床之所以效果好，是因为通气效果好，还是因为往复式振荡造成的培养液和瓶壁的撞击作用呢？

可以试试接种液体接种物！
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7楼2011-09-28 21:51:44
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by microxy at 2011-09-28 21:51:44:
可以试试接种液体接种物！

菌种不产孢子。如果用菌丝悬液接种，也得长出小菌丝球，或用匀浆机打碎才行，而我的菌在旋转式摇床上培养出来就是整个的一大团，怎么做种子液啊
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8楼2011-09-28 21:55:06
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
引用回帖:
6楼: Originally posted by amq7392 at 2011-09-28 21:22:02:
谢谢！不知道菌丝球大小和溶氧量有没有关系，我都是用棉塞做瓶塞的，据说棉塞通气不好。另外，往复式摇床之所以效果好，是因为通气效果好，还是因为往复式振荡造成的培养液和瓶壁的撞击作用呢？

我认为主要是 往复式震荡 的效果。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
9楼2011-09-29 07:39:16
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microxy

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by amq7392 at 2011-09-28 21:55:06:
菌种不产孢子。如果用菌丝悬液接种，也得长出小菌丝球，或用匀浆机打碎才行，而我的菌在旋转式摇床上培养出来就是整个的一大团，怎么做种子液啊

无菌匀浆 或者加10多个玻璃珠在种子摇瓶中。
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10楼2011-09-29 09:04:41
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