24小时热门版块排行榜    

查看: 2121  |  回复: 10
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 最近很活跃啊,鼓励加鼓励 2011-09-27 07:36:32
XI4ZHL(金币+2): 2011-09-28 11:36:21
1.要做连接的话,反应体系要扩大到40μL.
质粒 20μL
限制性内切酶 各2μL
Buffer    4μL
双蒸水   补足到40μL
37℃反应2h以上。
2.你的质粒加的太少了,浓度太低。
3.你的目的产物说是有设计酶切位点,那酶切位点有加保护碱基吗?有些酶切位点不加保护碱基,PCR产物直接酶切是切不动的,建议你连到T载体上再酶切。
4.你的实验没有加对照,你的载体酶切,你不能确定酶切是否完全,所以对照是必须的。
对照组:
酶切后的载体  1μL
10×T4 DNA ligase Buffer  1μL
T4 DNA ligase   1μL
双蒸水   up to 10μL
与实验组一起转化涂布抗性平板,看长出来的菌落多少,如果很多的话,说明你酶切不完全,要重新做过。
4楼2011-09-26 23:44:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

相关版块跳转 我要订阅楼主 XI4ZHL 的主题更新
信息提示
请填处理意见