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瓶儿花

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 最近很活跃啊，鼓励加鼓励 2011-09-27 07:36:32
XI4ZHL(金币+2): 2011-09-28 11:36:21

1.要做连接的话，反应体系要扩大到40μL.
质粒 20μL
限制性内切酶各2μL
Buffer 4μL
双蒸水补足到40μL
37℃反应2h以上。
2.你的质粒加的太少了，浓度太低。
3.你的目的产物说是有设计酶切位点，那酶切位点有加保护碱基吗？有些酶切位点不加保护碱基，PCR产物直接酶切是切不动的，建议你连到T载体上再酶切。
4.你的实验没有加对照，你的载体酶切，你不能确定酶切是否完全，所以对照是必须的。
对照组：
酶切后的载体 1μL
10×T4 DNA ligase Buffer 1μL
T4 DNA ligase 1μL
双蒸水 up to 10μL
与实验组一起转化涂布抗性平板，看长出来的菌落多少，如果很多的话，说明你酶切不完全，要重新做过。

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4楼2011-09-26 23:44:10

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