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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求达人推荐个双酶切的体系
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可可猫

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求达人推荐个双酶切的体系已有2人参与

第一次做双酶切，跑胶后质粒只有一条带。

用的是TaKaRa的XhoⅠ和BglⅡ。37摄氏度过夜切的，共用H  Buffer

PCR产物的浓度是30ng/微升，质粒的浓度是140ng/微升

PCR条带的大小是350bp，质粒是4900bp

我用的体系是
1.PCR产物   10XBuffer      5
                       DNA             30
                        XhoⅠ      1
                       BglⅡ       1
                        ddH2O         13
          共50微升

2.质粒载体
               10XBuffer    2        
                         质粒       5
                        XhoⅠ      1
                       BglⅡ       1
                        ddH2O         11  

共20微升


希望各位有经验的前辈帮我看看哈，多谢多谢了
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1楼2010-08-06 17:47:47
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有什么问题吗，应该是几条带
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2楼2010-08-06 18:08:44
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可可猫

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-08-06 18:08:44:
有什么问题吗，应该是几条带

难道质粒被双酶切后不该是两条带？
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3楼2010-08-06 18:15:33
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silicare

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lmzxcom1(金币+1):言之有理，不过切过的片段和没切过的，跑出来位置不一样的 2010-08-06 20:05:57
引用回帖:
Originally posted by 可可猫 at 2010-08-06 18:15:33:

难道质粒被双酶切后不该是两条带？

有些载体切下几十bp的小片段一跑就没了

而且如果你的 酶不是单克隆位点的话，切除多少都是有可能的

[ Last edited by silicare on 2010-8-6 at 18:41 ]
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4楼2010-08-06 18:40:37
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒形状和电泳的关系至今还没有一个绝对的说法，不能作为学术证据

关键还是你的实验和预期到底相差多少

两条带分别是多少
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5楼2010-08-07 10:48:41
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