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载体连接pcr片段一直连不上
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| 我用nde1和xba1双酶切后的载体片段pLSB2（约4.5kb）分别与两个pcr片段做连接，然后做转化，整个实验全部都重新做了一遍，可一直连不上。请那位达人指点一下 ,衷心地表示谢谢！ |
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 分子生物学实验问题 |
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15楼2012-11-28 15:17:57
2楼2011-09-25 11:13:42
3楼2011-09-25 21:05:35
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-09-26 09:16:46
蓝绿精灵(金币+5): 非常感谢你即使的建议，我再试试 2011-09-27 09:29:21
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-09-26 09:16:46
蓝绿精灵(金币+5): 非常感谢你即使的建议，我再试试 2011-09-27 09:29:21
| 首先连接时目的片段和酶切后质粒的摩尔量最好是1：1左右（可通过回收后跑胶 观看亮度大致判断一下 ） 转化时将连接产物加入感受态后30min不要动它 热激90s后放置冰上2min使其冷却 这些都是必须的步骤且不能有错 涂布板子时像你这种基本不长的 可以不进行涂布 直接将恢复1h后的菌液到于平板上晃匀 然后在超净台中开盖吹干 再进行培养 还有就是你可以选用转化效率高的超级感受态 你在鉴定时也不推荐你先抽质粒鉴定 可以做菌落PCR鉴定挑出阳性克隆再挑 |
4楼2011-09-26 09:07:34