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dhmdddd

木虫 (正式写手)

[求助] 奇怪的电泳图,求高手解释!!

额,以前没有遇到过这样子的情况,电泳图是质粒酶切图。上午提取这个质粒(和跑胶这个是相同质粒,但是不同的宿主),跑胶之后发现亮度可以,EcoRI单切后也是同样的情况,那个胶没有拍照……上传的这个电泳图是一样的质粒,EcoRI和HindIII双切,结果,结果就是这个样子……话说前边两次用错了buffer,切的效果还挺好……宝公司的酶,求解释啊,求高手给个解释!!先谢过!!
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上班族,学习ing……
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

我感觉是切没了!
真相是最大的奢侈品
2楼2011-09-13 21:57:32
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-13 21:57:32:
我感觉是切没了!

怎么会切没了呢?切了三个多小时,时间不算很长吧……
还有,上次我也是切这个质粒,也是EcoRI单切,结果很好……
上班族,学习ing……
3楼2011-09-13 22:17:39
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

忘记说了,我是50μ的体系,切了三个多小时!
上班族,学习ing……
4楼2011-09-14 14:20:50
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

这个问题到最后也没有找到到底是怎么切没有了,好像是试剂盒的问题,新换的试剂盒,最后师兄做酶切的时候也遇到了相同的问题,换了试剂盒之后就没有这种现象了……总之,有时候分子还是很难解释的……
上班族,学习ing……
5楼2011-10-13 15:25:54
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luoyang87

新虫 (初入文坛)

切之前的呢?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2011-10-14 13:42:39
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

dhmdddd(金币+1): 酶切体系如下:质粒30μ,水11μ,bufer,5μ,宝公司双酶各2μ,这个体系有问题吗?酶是刚刚开的新酶,应该没有问题 2011-10-14 19:01:23
这个肯定是酶及反应休系的问题
7楼2011-10-14 15:49:13
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wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

dhmdddd(金币+1): 质粒提取的很亮,跑胶时候没有点质粒 2011-10-14 19:04:32
怎么没有未酶切的质粒??怀疑你的质粒抽提质量很差
8楼2011-10-14 16:54:56
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by luoyang87 at 2011-10-14 13:42:39:
切之前的呢?

切之前质粒亮度很好,一般来说我们看亮度可以了就直接切了……
上班族,学习ing……
9楼2011-10-14 19:05:45
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-10-14 22:03:37
dhmdddd(金币+1): 谢谢~ 2011-10-16 02:04:31
酶是不是污染了,这个明显是切弥散掉了。我做基因组酶切最后就要这种图。
换一支酶试试~
10楼2011-10-14 19:31:12
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