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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 奇怪的电泳图，求高手解释！！
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-10-14 22:03:54
dhmdddd(金币+1): 是宝生物的酶，不是快酶，一般我们50的体系就切3-4小时 2011-10-14 22:12:27
可能用到是fast酶吧，切时间长了可能会乱切，30min足够了
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显微镜下的世界很精彩！
11楼2011-10-14 20:22:40
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
看天(金币+2): 鼓励 2011-10-14 22:04:05
dhmdddd(金币+1): 谢谢，我前边说了，换了质粒提取试剂盒后，这种现象就没有了，师兄用别的酶切的也出现这样子的情况，但是换了质粒提取试剂盒后也没有出现这种情况，所以……呵呵，之前提这个问题是没有换试剂盒……这个问题已经很长时间了，谢谢您的帮助~ 2011-10-14 22:15:23
引用回帖:
7楼: Originally posted by doublehelix at 2011-10-14 15:49:13:
这个肯定是酶及反应休系的问题

是酶的问题，该换一支再试试，以前试验曾出现过这 种情况，换了新的就没事了，也是TakRa的。。。
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12楼2011-10-14 21:54:10
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keennes

木虫 (著名写手)
很少遇到这种情况的。有必要用这么大的体系？用TaKaRa的内切酶，1微克质粒，20微升体系，效果非常不错。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

dhmdddd
独上高楼，望尽天涯路……
13楼2011-10-17 20:07:27
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by keennes at 2011-10-17 20:07:27:
很少遇到这种情况的。有必要用这么大的体系？用TaKaRa的内切酶，1微克质粒，20微升体系，效果非常不错。

因为后面要做胶回收，后面酶连需要量也比较大，所以用了50的体系~
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上班族，学习ing……
14楼2011-10-17 23:27:17
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youngker918

金虫 (正式写手)
把EcoRI的用量减小，EcoRI在M Buffer中有Star活性的，如果EcoRI量大了话会切飞掉的
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天才就怕不够天才，坏又不够坏，天天都想离开，却不知何处才能换骨脱胎
15楼2011-10-18 10:08:04
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q307078056

银虫 (正式写手)
我觉得是切没了··   公司有某种产品也是如此·  不断的切然后在切口进行标记，哈哈哈！  破碎的片段，就呈如此条带~   LZ
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人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
16楼2011-10-18 12:11:47
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
污染好重啊
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17楼2011-10-18 14:59:58
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keennes

木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by dhmdddd at 2011-10-17 23:27:17:
因为后面要做胶回收，后面酶连需要量也比较大，所以用了50的体系~

哦，回收的话，我一般做200微升体系，用10微克质粒，内切酶各5微升，一般2h可以完全酶切了。
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独上高楼，望尽天涯路……
18楼2011-10-18 15:45:10
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