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jlh02051118

银虫 (小有名气)

[求助] 奇怪的电泳图

目的带和Marker都出现了拖尾和皱褶。电泳液新换用的是1%的胶,颗粒完全融化,电压70V,染料用的是Gelgreen的。以前在老所跑电泳没出现过这种现象,搬到新所后把EB换了后就出现这种现象,难道是染料的事?
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athenawj

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

jlh02051118(金币+1): 谢谢,打算再耐心做一次 2011-09-24 13:25:58
引用回帖:
1楼: Originally posted by jlh02051118 at 2011-09-23 18:55:47:
目的带和Marker都出现了拖尾和皱褶。电泳液新换用的是1%的胶,颗粒完全融化,电压70V,染料用的是Gelgreen的。以前在老所跑电泳没出现过这种现象,搬到新所后把EB换了后就出现这种现象,难道是染料的事?
[eimg]3 ...

难道是凝胶没凝好?
2楼2011-09-24 10:15:52
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nach

铜虫 (著名写手)

不让吃就去死

我觉得是缓冲液
不让吃就去死
3楼2011-09-24 23:35:15
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healerly

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

4楼2011-09-24 23:37:34
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nach

铜虫 (著名写手)

不让吃就去死

离子浓度不够
不让吃就去死
5楼2011-09-24 23:42:21
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q1009501313

铜虫 (小有名气)


dhd997(金币+1): 直觉? 2011-09-25 09:12:35
第六条最能说明问题、也许会有意想不到结果
6楼2011-09-25 08:21:39
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蓝慧

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good!鼓励交流,待楼主反馈信息后再授予专家指数一枚! 2011-09-25 16:35:49
wanhscn(金币+1): 欢迎常来分子生物版! 2011-09-25 16:36:31
wanhscn(金币+3, MolEPI+1): 根据版规,经讨论决定破格授予阁下一枚专家指数!祝国庆快乐! 2011-10-03 11:17:47
1、PCR产物自身原因:

往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。

对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量,减少引物的用量 ,减少循环次数,提高退火温度。

2、电泳体系的问题:

(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液。(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样。(3)电压太高。(4)适当把你的胶的浓度加大。(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照。
向着目标前进!
7楼2011-09-25 16:11:41
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jlh02051118

银虫 (小有名气)

多谢各位的同仁,针对所有的可能今天做了试验,可情况没改善多少。第一,胶1%凝了一个小时,很平整的。第二,50*tae 配方参照分子克隆指南(我们实验室经常用的)重新配的。第三电压60V。恒压。第四Marker做了对照也有拖尾。现在唯一没变的就是染料。
8楼2011-09-25 20:46:06
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