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ppt1210

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 跑2D电泳遇到问题,求解

昨天在配SDS缓冲液的时候遇到了问题,一直不溶,在大家帮助下解决了,今天又遇到了新问题。还是与缓冲液有关,在跑2D第二相的时候,跑到1/3左右的时候就跑不动了,biorad的电泳仪显示E01,刚开始以为是仪器问题,重开,然后看了在220V电压下的下电流只有20-30mA,过一会儿就又不行了。换了仪器还是一样,显示E01。于是想到可能是新配的SDS缓冲液的问题,赶紧换上之前师姐配的那些缓冲液,就能正常运行了。唉,中间间断了近1个小时,不知道sample会不会受很大影响。。

下面是我配缓冲液的比例以及所用试剂,为何配的SDS electrophoresis running buffer总有沉淀?

配置跑SDS-PAGE用的电泳液时候,先配10倍的,用时在稀释成1倍的,具体配方如下:
250mM Tris base, 1.92 M glycine, 1% SDS, 加水到1L,
具体称了 30.3 g Tris base,144.1g Glycine, 10 g SDS,

Tris base: sigma公司, 纯度>99.9%
Glycine: 1L公司,纯度>99%
SDS: USB公司, (最有可能出问题的是这个,这是02年的一瓶了,从隔壁借的,之前我们自己的用完了,前面两个药品都是新的。)

求大家帮忙分析下原因。
谢谢!!
谢谢
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我对人生无悔,奈何心中有愧。。。
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

ppt1210(金币+1): 溶了,现在问题是SDS缓冲液有问题,跑电泳不正常,电流很低,应该到130mA,的却只有30mA 2011-09-02 11:13:47
SDS不溶的话很好办,培养箱里面加加热就可以了。或者你看看实验室是不是空调温度太低了。
寝室楼的大爷、大妈都是哲学家,他们每天都在思考人类最根本的三个问题:你是谁?你从哪儿来?要去哪儿?
2楼2011-09-02 10:17:18
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ppt1210

至尊木虫 (著名写手)

不好意思,帖子编辑的时候有点问题,声明一下,沉淀问题已经解决,现在完全溶解了,要解决的问题是,SDS缓冲液用来跑2D的时候电流很小,不能正常使用,请帮忙分析原因
我对人生无悔,奈何心中有愧。。。
3楼2011-09-02 11:15:51
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