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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 跑2D电泳遇到问题，求解
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ppt1210

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 跑2D电泳遇到问题，求解

昨天在配SDS缓冲液的时候遇到了问题，一直不溶，在大家帮助下解决了，今天又遇到了新问题。还是与缓冲液有关，在跑2D第二相的时候，跑到1/3左右的时候就跑不动了，biorad的电泳仪显示E01，刚开始以为是仪器问题，重开，然后看了在220V电压下的下电流只有20-30mA，过一会儿就又不行了。换了仪器还是一样，显示E01。于是想到可能是新配的SDS缓冲液的问题，赶紧换上之前师姐配的那些缓冲液，就能正常运行了。唉，中间间断了近1个小时，不知道sample会不会受很大影响。。

下面是我配缓冲液的比例以及所用试剂，为何配的SDS electrophoresis running buffer总有沉淀？

配置跑SDS-PAGE用的电泳液时候，先配10倍的，用时在稀释成1倍的，具体配方如下：
250mM Tris base, 1.92 M glycine, 1% SDS, 加水到1L,
具体称了 30.3 g Tris base,144.1g Glycine, 10 g SDS,

Tris base: sigma公司, 纯度>99.9%
Glycine: 1L公司，纯度>99%
SDS: USB公司， （最有可能出问题的是这个，这是02年的一瓶了，从隔壁借的，之前我们自己的用完了，前面两个药品都是新的。）

求大家帮忙分析下原因。
谢谢！！
谢谢
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我对人生无悔，奈何心中有愧。。。
1楼 2011-09-01 19:15:20
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

ppt1210(金币+1): 溶了，现在问题是SDS缓冲液有问题，跑电泳不正常，电流很低，应该到130mA，的却只有30mA 2011-09-02 11:13:47
SDS不溶的话很好办，培养箱里面加加热就可以了。或者你看看实验室是不是空调温度太低了。
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寝室楼的大爷、大妈都是哲学家，他们每天都在思考人类最根本的三个问题：你是谁？你从哪儿来？要去哪儿？
2楼2011-09-02 10:17:18
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ppt1210

至尊木虫 (著名写手)
不好意思，帖子编辑的时候有点问题，声明一下，沉淀问题已经解决，现在完全溶解了，要解决的问题是，SDS缓冲液用来跑2D的时候电流很小，不能正常使用，请帮忙分析原因
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我对人生无悔，奈何心中有愧。。。
3楼2011-09-02 11:15:51
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