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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 连接后转化子PCR出现非特异性的条带

实验主要内容:
1、将目的基因和已经连有启动子的载体连接,挑单菌落PCR验证是否含有目的条带
2、挑取能 P 出条带的单菌落,摇菌,保藏,提质粒
3、用提取的质粒,再次PCR验证是否含有启动子基因
问题:
PCR验证是否含有启动子的时候,跑胶结果显示:除了自己的启动子条带,还出现2条非特异性的条带,但是阳性对照只有一条,之前一直是用这个体系,出现这样的问题,很怕是自己摇菌的过程中出现污染所致。
还请各位帮忙分析一下。 目前本人已经在做质粒的单双酶切验证,结果没出来。
如图  左一:阳性对照(启动子条带1000bp多一点)
      右一:Marker(4500、3000、2000、1200、800、500、200)
          其他全部是质粒PCR(每个做了两个平行,一共7个)
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

9楼2011-09-01 15:54:08
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查看全部 11 个回答

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

yesucao(金币+3): 有这个考虑 2011-09-01 10:45:35
yesucao(金币+3): 散币了,酶切结果出来了,实验失败,继续努力 2011-09-01 15:53:03
如果能测序的话,建议楼主最好测序可确定到底连入的是不是自己想要的片段!
jiayoubashaonian
2楼2011-08-31 19:46:49
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yesucao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-31 19:46:49:
如果能测序的话,建议楼主最好测序可确定到底连入的是不是自己想要的片段!

PCR,割胶回收,T载体连接,然后送去测序吗??还是可以直接送去测序呢???
3楼2011-08-31 19:49:35
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

yesucao(金币+1): 2011-09-01 10:45:46
yesucao(金币+3): 散币了,酶切结果出来了,实验失败,继续努力 2011-09-01 15:53:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by yesucao at 2011-08-31 19:49:35:
PCR,割胶回收,T载体连接,然后送去测序吗??还是可以直接送去测序呢???

楼主有引物的话,可以直接送质粒测序,今天送明天出,可以看一下到底是哪里出了问题!当然质粒浓度别太小,可问一下技术!
jiayoubashaonian
4楼2011-08-31 19:51:34
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