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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good!我们也是挑的菌落，比较省事。 2011-08-26 11:43:50
madengyu(金币+2): 2011-08-26 11:48:38

楼主做菌液PCR验证克隆的话，其实可以这样！
首先根据你描述的体系，模板有些多了，
其实你不用那菌液当模板的，将疑似单克隆划到平板上（一个平板可以划很多），然后挑菌进行裂解，用裂解的菌液当模板，这样岂不是很方便？如果你摇菌的话，确实有些麻烦和费事，如果有疑似10个正确的单克隆，你难道还接10管菌？
我们这里都是挑菌裂解进行PCR验证的，
当然了PCR验证只是一个初步验证连接的检验方法，如果能P出来，那么基本就对了，这时候就需要提个质粒，酶切一下就OK了，国际上还是比较认可酶切的；
当然了没有P出来并不代表没有连接上，有可能是你的PCR问题。。。
所以提取质粒进行酶切还是后期必须的。。。
祝好运！