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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » WB检测磷酸化蛋白
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geek23

木虫 (小有名气)

[求助] WB检测磷酸化蛋白

各位大侠,有用过CST的磷酸化抗体检测磷酸化蛋白的吗?请问在整个提蛋白以及WB过程中有什么注意事项?小女最近做了几个抗体都没有条带.急~~~
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Bethechangeyouwishtosee.
1楼2011-08-15 10:23:24
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vetzhangshen

铁虫 (初入文坛)
最近我也在做磷酸化的蛋白～也是跑了好多次了，条带是隐约有的，感觉条件很难摸啊～
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30楼2012-02-18 23:50:15
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vetzhangshen

铁虫 (初入文坛)
提取蛋白的时候，磷酸酶抑制剂也是加的，PMSF,NaF和Na3VO4都加了，上样量加到了150ug每孔，ECL发光之后还是看不见亮光啊，压片一般都压个二十分钟的~太苦恼了~
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32楼2012-02-19 16:44:52
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vetzhangshen

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
33楼: Originally posted by geek23 at 2012-02-19 16:51:52:
你是药物处理后提取蛋白吗,如果是估计还要摸一下提蛋白的时间点, 有的蛋白磷酸化发生很迅速,很短暂的.

哦，是的，我是药物处理之后提取的，嗯，谢谢你的意见，我准备把不同时间点的都提取出来做一下。
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35楼2012-02-22 10:48:59
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