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geek23

木虫 (小有名气)

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专业: 细胞信号转导

[求助] WB检测磷酸化蛋白

各位大侠,有用过CST的磷酸化抗体检测磷酸化蛋白的吗?请问在整个提蛋白以及WB过程中有什么注意事项?小女最近做了几个抗体都没有条带.急~~~

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Bethechangeyouwishtosee.

1楼2011-08-15 10:23:24

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wenjiji85

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我觉得磷酸化蛋白检测和总蛋白不差太多，不过有几点要注意：
1、磷酸化过程比较快，时间点确实不要太晚
2、提蛋白一定加蛋白酶抑制剂
3、封闭液不能用脱脂牛奶，得用BSA
4、蛋白最好不要冻融，冻融后磷酸化蛋白降解严重
5、有时候磷酸化蛋白是很弱，可以考虑用更强的ECL显色液试试。

15楼2011-11-13 15:18:30

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wenjiji85

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呃，是磷脂酶抑制剂，打错了

16楼2011-11-13 15:19:53

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