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geek23

木虫 (小有名气)

[求助] WB检测磷酸化蛋白

各位大侠,有用过CST的磷酸化抗体检测磷酸化蛋白的吗?请问在整个提蛋白以及WB过程中有什么注意事项?小女最近做了几个抗体都没有条带.急~~~
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Bethechangeyouwishtosee.
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wenjiji85

新虫 (初入文坛)

我觉得磷酸化蛋白检测和总蛋白不差太多,不过有几点要注意:
1、磷酸化过程比较快,时间点确实不要太晚
2、提蛋白一定加蛋白酶抑制剂
3、封闭液不能用脱脂牛奶,得用BSA
4、蛋白最好不要冻融,冻融后磷酸化蛋白降解严重
5、有时候磷酸化蛋白是很弱,可以考虑用更强的ECL显色液试试。
15楼2011-11-13 15:18:30
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

也想做此类相关的课题,但并不是太懂,友情帮顶
2楼2011-08-15 16:26:06
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利! 2011-08-15 17:49:33
geek23(金币+5): 请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答. 2011-08-16 16:49:42
CST的抗体应该不错,但不知你的是单克隆还是多克隆,没有条带,是不是磷酸化没有形成。磷酸化有时形成的时间比较短,做实验时要严格对待。
3楼2011-08-15 16:48:37
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geek23

木虫 (小有名气)

请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答.
Bethechangeyouwishtosee.
4楼2011-08-16 16:49:04
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