应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 问题请教-western blotting
51/1返回列表
查看: 2659  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

long2502

金虫 (小有名气)

[交流] 问题请教-western blotting

最近小弟在做WB，使用的是HRP-ECL发光法：将A、B发光液按等比例稀释混合均匀滴在PVDF膜上，然后暴光显影（时间大于五分钟），能把目的条带显出来，但是我的内参显示不出，最后用DAB显影，可以看到明显的内参的带。
请问师兄师姐，师弟师妹，大哥大姐，小弟小妹们，why? how to tackle the problem.
Thank you.

[ Last edited by 1949stone on 2011-8-7 at 11:31 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-08-03 08:28:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

明若瞳兮

新虫 (初入文坛)
★
long2502(金币+1):谢谢参与
很可能是抗体不好了~~新配个抗体试试吧
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-08-06 21:11:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

KinnerHuang

新虫 (初入文坛)
★
long2502(金币+1):谢谢参与
首先恭喜你做出来啦！理论上内参也显示不出来 你加的一抗、二抗跟目的蛋白结合的 不跟内参结合的； HRP在二抗上 不跟内参结合 内参怎么会显影呢？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-08-04 10:27:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

long2502

金虫 (小有名气)
我的意思，能把目的条带做出来。然后再加B-actin一抗，过夜，然后加B-actin二抗，然后去显影，但就是显不出来了。就算我延长暴光时间还是白版了。目的条
带能显出来，说明提的蛋白或者跑胶，转膜都没有多大问题了。
赞一下 回复此楼
3楼2011-08-04 19:31:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晴天1882

木虫 (正式写手)
★
long2502(金币+1):谢谢参与
也不知道你在哪里提取的蛋白，会不会是此种内参蛋白不表达？根本没有内参蛋白，所以加完抗体也没有，重新选个内参看看
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-08-05 18:16:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
blackrose80898楼
2011-08-06 21:14   回复  
long2502(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
7楼: Originally posted by 明若瞳兮 at 2011-08-06 21:11:34: 很可能是抗体不好了~~新配个抗体试试吧

sa100200316楼
2011-08-05 19:20   回复  
long2502(金币+1):谢谢参与
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭