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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 双酶切验证阳性克隆的问题
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rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] 求助 双酶切验证阳性克隆的问题

本人将某 2600bp的目的基因 和 pet28a载体 双酶切，切胶回收，T4连接酶4度过夜连接， 将10uL连接产物加到120uL感受态细胞中， 加入800uL无抗性培养基 摇菌50分钟， 涂平板10块，每块80uL, 过夜后，发现只长了一个菌落。。。挑取菌落培养，提取质粒，双酶切验证是否是阳性克隆，切成了两条片段，发现其中较短的那条片段比目的片段长！！！！！！！请问这是咋回事？谢谢！！！
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1楼 2011-08-01 16:05:57
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
我今天也出现相同的情况，不知如何解决
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10楼2013-11-01 09:46:03
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
我连接前的片段还经过酶切、测序验证的
胶回收后还进行了电泳
只是感觉浓度稀点，比MARKER薄点
但是今天做完转化8个板子中间有好些个没一个斑的
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11楼2013-11-01 09:49:31
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by charles08 at 2013-11-01 09:49:31
我连接前的片段还经过酶切、测序验证的
胶回收后还进行了电泳
只是感觉浓度稀点，比MARKER薄点
但是今天做完转化8个板子中间有好些个没一个斑的

结果真心很伤人啊，不知楼主最后怎么解决的
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12楼2013-11-01 09:49:58
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