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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于质粒单酶切
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于质粒单酶切

若是所提质粒浓度较低，用来单酶切或双酶切时要注意些什么么？我酶切完以后还要切胶回收的。
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1楼 2011-07-30 16:13:20
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抹脖丧

新虫 (初入文坛)
构建好的质粒，明明只有一个的酶切位点，为什么切完总是两条带？请求各位高人解答。谢谢！
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3楼2013-04-10 16:18:47
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-07-30 22:47:34
liuwei78(金币+5): 2011-07-31 08:59:20
如果质粒浓度太低的话做酶切也可以，但是为什么楼主不想一下为什么质粒浓度提取出来浓度会低呢？当然了，这跟宿主菌和提质粒的步骤有很大关系；

浓度太低的话，载体可以多添加一些，酶切体积也可以大一些；当然了这要看你做酶切验证还是以后做下游工作，如果做酶切验证，20ul体系，30ul体系都可以做的；如果要进行下游工作的话，标准体系是50ul，也已大一些，这个视你质粒的多少了；

酶切完以后先电泳看看是否完全切开，然后再进行纯化，不然很影响下游工作，比如连接。。。酶切完终体积应该小一些，50ul的酶切体系可以浓缩到20或者30ul，这样便于后期工作。。。

祝好运！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-07-30 17:19:25
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