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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上
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380665135

新虫 (初入文坛)

[求助] 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上

我用简并引物扩一段未知序列，扩出来后连T载体，怎么鉴定有没有连上呢，不能用简并引物去扩吧，酶切的话不知道目的序列的酶切位点情况，只能选几个试试 ，但效果都不理想啊，这一时半会也不知上哪去找通用引物，怎么办呢，急！
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1楼 2011-07-21 22:42:55
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380665135

新虫 (初入文坛)
我用载体上的酶切位点把载体切开成线性，跑电泳看大小可不可以啊
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9楼2011-07-22 09:17:34
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-22 08:18:15
试着跑一个电泳，PCR产物是一条带，T载体也是一条带，连接成功的是另一条带，但是要求DNA较多，连接体系不至于跑了电泳就用完了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-22 07:28:06
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-07-22 11:55:04
可以用引物扩增一下试试；
当然了，序列你既然都知道，何不找一个合适的酶切位点呢？酶切验证一下即可。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-07-22 08:25:50
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-07-22 11:55:16
目的序列的酶切位点可以用软件查找的
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-07-22 08:34:49
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