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380665135

新虫 (初入文坛)

[求助] 兼并引物PCR连T载体后,怎么鉴定有没有连上

我用简并引物扩一段未知序列,扩出来后连T载体,怎么鉴定有没有连上呢,不能用简并引物去扩吧,酶切的话不知道目的序列的酶切位点情况,只能选几个试试 ,但效果都不理想啊,这一时半会也不知上哪去找通用引物,怎么办呢,急!
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶


西瓜(金币+1): 鼓励 2011-07-22 11:55:16
目的序列的酶切位点可以用软件查找的
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-07-22 08:34:49
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-22 08:18:15
试着跑一个电泳,PCR产物是一条带,T载体也是一条带,连接成功的是另一条带,但是要求DNA较多,连接体系不至于跑了电泳就用完了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-22 07:28:06
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-07-22 11:55:04
可以用引物扩增一下试试;
当然了,序列你既然都知道,何不找一个合适的酶切位点呢?酶切验证一下即可。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-07-22 08:25:50
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maggie3277

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


380665135(金币+2): 2011-07-22 09:11:17
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-07-22 11:55:29
用T载体上的通用引物扩增下,看看pcr得到的片段大小,不就ok?
5楼2011-07-22 08:56:27
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