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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上
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380665135

新虫 (初入文坛)

[求助] 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上

我用简并引物扩一段未知序列，扩出来后连T载体，怎么鉴定有没有连上呢，不能用简并引物去扩吧，酶切的话不知道目的序列的酶切位点情况，只能选几个试试 ，但效果都不理想啊，这一时半会也不知上哪去找通用引物，怎么办呢，急！
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1楼 2011-07-21 22:42:55
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maggie3277

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
380665135(金币+2): 2011-07-22 09:11:17
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-07-22 11:55:29
用T载体上的通用引物扩增下，看看pcr得到的片段大小，不就ok？
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5楼2011-07-22 08:56:27
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maggie3277

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 就是这样！ 2011-07-22 11:55:57
引用回帖:
Originally posted by 380665135 at 2011-07-22 09:17:34:
我用载体上的酶切位点把载体切开成线性，跑电泳看大小可不可以啊

你之前酶切不是用的载体上的酶切位点么？应该是可以的，不过电泳的时候要把线性的未连目的片段的空载体一起电泳做个对照。
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10楼2011-07-22 09:30:27
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