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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Tricine-SDS-PAGE电泳问题求助。急！！！
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gaochaohui

新虫 (小有名气)

[求助] Tricine-SDS-PAGE电泳问题求助。急！！！

最近在做Tricine-SDS-PAGE电泳检测分子量在9KDa-15KDa的一种蛋白。我用的分离胶的浓度为15%，积层胶为3.9%。但是出现了一些问题。跑电泳时蛋白条带很宽，而且是越来越宽。跑完电泳后蛋白条带也不明显。这有可能是什么原因呢。另外，分离胶的浓度和蛋白的分子量大小有关系吗，积层胶和分离胶的浓度如何确定。跑Tricine-SDS-PAGE电泳需要注意哪些问题。如果直接用表达蛋白的菌体做电泳行吗？求知道虫友的指点一下。
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结交天下有志“虫友”！！！
1楼 2011-07-19 18:00:58
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silicare

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【答案】应助回帖

gaochaohui(金币+1): 2011-07-22 10:45:25
gaochaohui(金币+1): 2011-08-01 10:35:52
gaochaohui(金币+1): 2011-08-15 16:59:55
引用回帖:
Originally posted by gaochaohui at 2011-07-19 18:52:29:
不好意思，没有图。跑电泳的时候蛋白条带没有聚集成一条很窄的条带。没跑预染marker。

没跑预染marker你何来的越跑越宽，你能在电泳过程中看到蛋白？
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9楼2011-07-20 08:17:25
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普通回帖

silicare

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【答案】应助回帖

gaochaohui(金币+1): 2011-07-19 18:50:08
gaochaohui(金币+1): 2011-08-15 16:59:35
图呢？
很宽是什么意思？
跑预染marker了吗？
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2楼2011-07-19 18:39:43
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gaochaohui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-07-19 18:39:43:
图呢？
很宽是什么意思？
跑预染marker了吗？

不好意思，没有图。跑电泳的时候蛋白条带没有聚集成一条很窄的条带。没跑预染marker。
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结交天下有志“虫友”！！！
3楼2011-07-19 18:52:29
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-19 20:33:06
marker 跑的宽不？如果宽就是胶的问题，重新配一下配胶的试剂，着重看下PH值。如果不宽，那有可能是蛋白样品的问题，loadding buffer浓度对不对？
还有就是15%的胶想把蛋白条带压成线不容易，我这里也在跑，也是这样，但显影后蛋白条带还可以。15%的胶跑9-15kd的蛋白可以了。问下，你是直接染胶的吗？
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4楼2011-07-19 18:55:59
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)
没marker啊？那你怎么确定你的目的蛋白在哪个位置？？
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5楼2011-07-19 18:57:16
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gaochaohui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 子曰包子好吃 at 2011-07-19 18:55:59:
marker 跑的宽不？如果宽就是胶的问题，重新配一下配胶的试剂，着重看下PH值。如果不宽，那有可能是蛋白样品的问题，loadding buffer浓度对不对？
还有就是15%的胶想把蛋白条带压成线不容易，我这里也在跑，也是 ...

是直接染得。考马斯亮蓝G-250
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结交天下有志“虫友”！！！
6楼2011-07-19 19:20:43
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)
那会不会是好几条蛋白条带重叠在一起看起来条带很宽啊？
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7楼2011-07-19 19:23:46
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gaochaohui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 子曰包子好吃 at 2011-07-19 19:23:46:
那会不会是好几条蛋白条带重叠在一起看起来条带很宽啊？

应该不是啊。
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8楼2011-07-19 19:31:41
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gppwfh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-07-20 15:00:36
gaochaohui(金币+2): 2011-07-22 10:45:48
gaochaohui(金币+2): 2011-08-01 10:36:15
gaochaohui(金币+1): 2011-08-15 17:00:01
我有时候也是条带很宽，但是染色后看着蛋白没啥异常。一般我们都忽略了，如果出现条带宽的话

我们分离胶一般都用10%或者12%。即使做tricine 也是
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10楼2011-07-20 13:33:15
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