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gaochaohui

新虫 (小有名气)

[求助] Tricine-SDS-PAGE电泳问题求助。急!!!

最近在做Tricine-SDS-PAGE电泳检测分子量在9KDa-15KDa的一种蛋白。我用的分离胶的浓度为15%,积层胶为3.9%。但是出现了一些问题。跑电泳时蛋白条带很宽,而且是越来越宽。跑完电泳后蛋白条带也不明显。这有可能是什么原因呢。另外,分离胶的浓度和蛋白的分子量大小有关系吗,积层胶和分离胶的浓度如何确定。跑Tricine-SDS-PAGE电泳需要注意哪些问题。如果直接用表达蛋白的菌体做电泳行吗?求知道虫友的指点一下。
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结交天下有志“虫友”!!!
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gaochaohui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 子曰包子好吃 at 2011-07-19 18:55:59:
marker 跑的宽不?如果宽就是胶的问题,重新配一下配胶的试剂,着重看下PH值。如果不宽,那有可能是蛋白样品的问题,loadding buffer浓度对不对?
还有就是15%的胶想把蛋白条带压成线不容易,我这里也在跑,也是 ...

是直接染得。考马斯亮蓝G-250
结交天下有志“虫友”!!!
6楼2011-07-19 19:20:43
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silicare

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【答案】应助回帖

gaochaohui(金币+1): 2011-07-19 18:50:08
gaochaohui(金币+1): 2011-08-15 16:59:35
图呢?
很宽是什么意思?
跑预染marker了吗?
2楼2011-07-19 18:39:43
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gaochaohui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-07-19 18:39:43:
图呢?
很宽是什么意思?
跑预染marker了吗?

不好意思,没有图。跑电泳的时候蛋白条带没有聚集成一条很窄的条带。没跑预染marker。
结交天下有志“虫友”!!!
3楼2011-07-19 18:52:29
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-19 20:33:06
marker 跑的宽不?如果宽就是胶的问题,重新配一下配胶的试剂,着重看下PH值。如果不宽,那有可能是蛋白样品的问题,loadding buffer浓度对不对?
还有就是15%的胶想把蛋白条带压成线不容易,我这里也在跑,也是这样,但显影后蛋白条带还可以。15%的胶跑9-15kd的蛋白可以了。问下,你是直接染胶的吗?
4楼2011-07-19 18:55:59
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