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bear0329

金虫 (正式写手)

[求助] 酶切后终止反应问题

我是做PCR产物进行酶切,然后送去做扫描的,我想问的是,在终止反应的时候是用高温65℃终止还是用酶的10×Loading buffer ? 谢谢啊~
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以马内利!
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shaquila

金虫 (正式写手)


西瓜(金币+1): 鼓励 2011-07-18 17:17:29
某些内切酶高温未必失活
貌似neb还是fermentas有张表,以前见过~~
6楼2011-07-18 13:46:52
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查看全部 7 个回答

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

这两个终止方法效果有差别吗?我只知道高温应该是可以的。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-17 18:13:10
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
bear0329(金币+2): 谢谢啊 2011-07-18 09:12:11
dhd997(金币+2): good 2011-07-18 12:48:53
loading buffer 应该不对,终止酶反应的方法 高温或者加酸碱都有,视具体的酶促反应而定的。推荐65℃终止
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
3楼2011-07-17 20:35:56
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
bear0329(金币+2): 谢谢你 2011-07-18 09:11:52
dhd997(金币+2): good 2011-07-18 12:49:01
loading buffer里面含有EDTA,所以可以终止反应,但是不知道它的颜色会不会对你后续的实验产生影响。个人感觉65℃更适用一些吧
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-07-17 20:41:03
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