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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切后终止反应问题
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bear0329

金虫 (正式写手)

[求助] 酶切后终止反应问题

我是做PCR产物进行酶切，然后送去做扫描的，我想问的是，在终止反应的时候是用高温65℃终止还是用酶的10×Loading buffer ？ 谢谢啊~
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以马内利！
1楼 2011-07-17 17:28:25
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
这两个终止方法效果有差别吗？我只知道高温应该是可以的。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-17 18:13:10
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
bear0329(金币+2): 谢谢啊 2011-07-18 09:12:11
dhd997(金币+2): good 2011-07-18 12:48:53
loading buffer 应该不对，终止酶反应的方法 高温或者加酸碱都有，视具体的酶促反应而定的。推荐65℃终止
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
3楼2011-07-17 20:35:56
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
bear0329(金币+2): 谢谢你 2011-07-18 09:11:52
dhd997(金币+2): good 2011-07-18 12:49:01
loading buffer里面含有EDTA，所以可以终止反应，但是不知道它的颜色会不会对你后续的实验产生影响。个人感觉65℃更适用一些吧
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-07-17 20:41:03
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-07-18 15:00:49
我用的NEB的内切酶 加热65即可
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
5楼2011-07-18 00:26:31
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-07-18 17:17:29
某些内切酶高温未必失活
貌似neb还是fermentas有张表，以前见过～～
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6楼2011-07-18 13:46:52
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bear0329

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-07-18 13:46:52:
某些内切酶高温未必失活
貌似neb还是fermentas有张表，以前见过～～

谢谢啊，我看看去
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以马内利！
7楼2011-07-18 17:10:37
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