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wendaojue

铜虫 (著名写手)

[求助] 构建载体后不表达

做了好久，总算把载体构建好了，测序都没问题，但是就是不表达，很郁闷。想请教下，有什么原因会引起不表达吗？
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1楼2011-07-15 16:44:48
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by ybs007 at 2011-07-16 20:13:21:
楼主所说的目的蛋白不表达是如何鉴定的？
检测一个蛋白是否表达包括，转化子的鉴定，mRNA水平的检测，蛋白水平的检测包括液相色谱检测，抗体检测，质谱检测，蛋白活性检测。不知道楼主是从哪个水平上得出的目的蛋 ...

此位虫友说的很有道理 的确表达不容易 需要慢慢来做
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
6楼2011-07-18 00:41:04
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 对的 2011-07-15 18:54:42
说的太笼统，希望详细点才好给人回答。
不知道你的是原核表达还是真核，有没有验证转化子，启动子是不是和宿主匹配、宿主会不会降解产物等等。
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2楼2011-07-15 16:50:15
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励 2011-07-15 18:54:51
有没有分析稀有密码子存在情况，还有读码框是否正确？很多原因都能引起不表达的。
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3楼2011-07-15 17:04:47
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wendaojue

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2011-07-15 16:50:15:
说的太笼统，希望详细点才好给人回答。
不知道你的是原核表达还是真核，有没有验证转化子，启动子是不是和宿主匹配、宿主会不会降解产物等等。

不好意思，我也是刚开始做克隆，是在真核中表达，启动子是CMV。如何验证转化子呢？我酶切和测序都是对的。
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4楼2011-07-16 13:53:38
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