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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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[交流] EK酶切后到底带不带多余氨基酸？

如图所示的表达质粒多克隆位点，如果用Nco I和Xho I 酶切插入目的序列，表达后用EK酶酶切。在酶切位点和目的序列N端之间肯定会多出来两到三个氨基酸是吧？
那为什么有些文章说EK酶切后其N段与天然蛋白质完全一样呢？
很费解。我认为不管用什么酶，怎么切，N端必然都会带几个多余氨基酸的。

[ Last edited by snoopyzxx on 2011-7-8 at 15:02 ]

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1楼 2011-07-08 15:01:30

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小周

铁杆木虫 (著名写手)

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★
snoopyzxx(金币+1):谢谢参与

肠激酶由于专一识别5个氨基酸多肽(D-D-D-D-K-X1)并在赖氨酸的羧基上切割,是N末端融合通常选择的蛋白酶,在其他残基的不规则切割发生水平较低,这取决于蛋白质底物的构象(Choi et al.2001). 肠激酶轻链的分子量为26.3kDa. 一个单位定义为在23℃下切割50ug 融合蛋白在8小时内达到95%切割率所需的酶量.生化分析已经表明切割效率取决于D4K识别位点下游的X1 氨基酸残基.

可以不留多余的氨基酸的。