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friya0910新虫 (正式写手)
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酶切的相关问题
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| 本人做蛋白的体外表达，现在已把目的片段连接到T载体测序（测序中），上、下游引物分别含有NcoI和BamHI酶切位点，可是突然发现我的T载体在TA克隆位点附近（不超过10个碱基）也有BamHI酶切位点，那我后续要用这两个酶双酶切T载体获得目的基因的话，载体上的BamHI酶切位点对我后续实验的影响大不大啊？恳请高人指点一下！ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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2楼2011-07-05 18:57:15
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 学习了！ 2011-07-05 19:59:52
amisking(EPI+1): 鼓励应助 2011-07-05 20:04:19
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amisking(EPI+1): 鼓励应助 2011-07-05 20:04:19
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不过话说回来，你为什么要先TA克隆呢？如果PCR出来之后直接将表达载体和外源片段双酶切，然后连接，再转化大肠杆菌，挑取阳性单克隆培养提质粒，这时候再测序就省事了，也不用担心你载体上的BamHI酶切位点的干扰了，这样一来整个含有你的片段的质粒上就只有一个BamHI位点了，完全没有隐患。 测序费钱也不多，一个反应就30块钱而已，但可以测定超过600bp。 而且要双向测通，因为测序是两端不准的，从单链得到的结果可能含有不准的区间，需要从另一条单链测得的结果来拼接。 |
4楼2011-07-05 19:45:03
friya0910
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