应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何设计引物，扩增目的基因的ORF？
51/1返回列表
查看: 4100  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

倔强的投手

新虫 (小有名气)

[求助] 如何设计引物，扩增目的基因的ORF？

最近要做基因克隆，扩增基因的ORF
现在已经通过软件找到该基因的CDS和ORF
mRNA：23423-24558
CDS：23423-24412
ORF：23423-24412
该基因是没有内含子的基因
我现在要以cDNA为模板
设计引物将此段基因扩增出来
从目前的情况来看，3'端得引物可能比较好设计
因为CDS后还有一段序列
而CDS的5'端前面已经没有其他的序列了
这样的话设计引物就要从第一个核苷酸开始
我用Primer 5看了一下，5‘端根本没有合适的引物
会形成比较稳定的发卡结构
我想问的是，这种情况应该如何解决，应该怎样设计引物将此段扩增出来？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-26 18:31:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董红红

铜虫 (小有名气)
楼主你好，请问你是用什么软件找到该基因的ORF的呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-11-07 16:03:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

倔强的投手(金币+2): 2011-06-27 10:41:03
碰到这种情形你只能从第一个碱基开始了，挑了个稍微好点的，引物形成发卡结构也能P出来的。
赞一下 回复此楼
2楼2011-06-26 20:03:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

倔强的投手

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-26 20:03:26:
碰到这种情形你只能从第一个碱基开始了，挑了个稍微好点的，引物形成发卡结构也能P出来的。

关键形成的发卡结构的G值达到了-3.6，让我非常难办
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-26 20:50:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
倔强的投手(金币+2): 2011-06-27 10:41:11
西瓜(金币+3): 同意！-3.6已经很小了……一般认为-10才需要担心 2011-06-27 17:24:56
引用回帖:
Originally posted by 倔强的投手 at 2011-06-26 20:50:46:
关键形成的发卡结构的G值达到了-3.6，让我非常难办

-3.6影响不大，没有问题。我的引物有时候有-10的也能p出来
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-27 10:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭