24小时热门版块排行榜    

查看: 4512  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

倔强的投手

新虫 (小有名气)

[求助] 如何设计引物,扩增目的基因的ORF?

最近要做基因克隆,扩增基因的ORF
现在已经通过软件找到该基因的CDS和ORF
mRNA:23423-24558
CDS:23423-24412
ORF:23423-24412
该基因是没有内含子的基因
我现在要以cDNA为模板
设计引物将此段基因扩增出来
从目前的情况来看,3'端得引物可能比较好设计
因为CDS后还有一段序列
而CDS的5'端前面已经没有其他的序列了
这样的话设计引物就要从第一个核苷酸开始
我用Primer 5看了一下,5‘端根本没有合适的引物
会形成比较稳定的发卡结构
我想问的是,这种情况应该如何解决,应该怎样设计引物将此段扩增出来?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

倔强的投手

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-26 20:03:26:
碰到这种情形你只能从第一个碱基开始了,挑了个稍微好点的,引物形成发卡结构也能P出来的。

关键形成的发卡结构的G值达到了-3.6,让我非常难办
3楼2011-06-26 20:50:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

倔强的投手(金币+2): 2011-06-27 10:41:03
碰到这种情形你只能从第一个碱基开始了,挑了个稍微好点的,引物形成发卡结构也能P出来的。
2楼2011-06-26 20:03:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
倔强的投手(金币+2): 2011-06-27 10:41:11
西瓜(金币+3): 同意!-3.6已经很小了……一般认为-10才需要担心 2011-06-27 17:24:56
引用回帖:
Originally posted by 倔强的投手 at 2011-06-26 20:50:46:
关键形成的发卡结构的G值达到了-3.6,让我非常难办

-3.6影响不大,没有问题。我的引物有时候有-10的也能p出来
4楼2011-06-27 10:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

倔强的投手

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by sfb1020 at 2011-06-27 10:21:53:
-3.6影响不大,没有问题。我的引物有时候有-10的也能p出来

哦,不是吧
看来我的确的试试了
这个是不是要用好一点的Taq酶啊?
5楼2011-06-27 10:42:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +4 炎黄贵胄 2026-08-22 5/250 2026-08-24 02:09 by 流流伤
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧! +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖? +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见