应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何设计引物，扩增目的基因的ORF？
71/1返回列表
查看: 4140  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

倔强的投手

新虫 (小有名气)

[求助] 如何设计引物，扩增目的基因的ORF？

最近要做基因克隆，扩增基因的ORF
现在已经通过软件找到该基因的CDS和ORF
mRNA：23423-24558
CDS：23423-24412
ORF：23423-24412
该基因是没有内含子的基因
我现在要以cDNA为模板
设计引物将此段基因扩增出来
从目前的情况来看，3'端得引物可能比较好设计
因为CDS后还有一段序列
而CDS的5'端前面已经没有其他的序列了
这样的话设计引物就要从第一个核苷酸开始
我用Primer 5看了一下，5‘端根本没有合适的引物
会形成比较稳定的发卡结构
我想问的是，这种情况应该如何解决，应该怎样设计引物将此段扩增出来？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-26 18:31:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

倔强的投手(金币+2): 2011-06-27 10:41:03
碰到这种情形你只能从第一个碱基开始了，挑了个稍微好点的，引物形成发卡结构也能P出来的。
赞一下 回复此楼
2楼2011-06-26 20:03:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

倔强的投手

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-26 20:03:26:
碰到这种情形你只能从第一个碱基开始了，挑了个稍微好点的，引物形成发卡结构也能P出来的。

关键形成的发卡结构的G值达到了-3.6，让我非常难办
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-26 20:50:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
倔强的投手(金币+2): 2011-06-27 10:41:11
西瓜(金币+3): 同意！-3.6已经很小了……一般认为-10才需要担心 2011-06-27 17:24:56
引用回帖:
Originally posted by 倔强的投手 at 2011-06-26 20:50:46:
关键形成的发卡结构的G值达到了-3.6，让我非常难办

-3.6影响不大，没有问题。我的引物有时候有-10的也能p出来
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-27 10:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

倔强的投手

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sfb1020 at 2011-06-27 10:21:53:
-3.6影响不大，没有问题。我的引物有时候有-10的也能p出来

哦，不是吧
看来我的确的试试了
这个是不是要用好一点的Taq酶啊？
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-27 10:42:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfb1020

金虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 同意！ 2011-07-05 00:48:52
引用回帖:
Originally posted by 倔强的投手 at 2011-06-27 10:42:09:
哦，不是吧
看来我的确的试试了
这个是不是要用好一点的Taq酶啊？

不用，普通的tag酶就可以
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-07-04 20:59:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董红红

铜虫 (小有名气)
楼主你好，请问你是用什么软件找到该基因的ORF的呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-11-07 16:03:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 倔强的投手 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +6 南迦720 2026-02-28 6/300 2026-02-28 17:17 by 刘茉莉
[考研] 高分子化学与物理调剂 +3 好好好1233 2026-02-28 4/200 2026-02-28 17:13 by sandychj
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +3 弗格个 2026-02-28 5/250 2026-02-28 17:04 by sandychj
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考博] 博士推荐 +4 花儿笑? 2026-02-21 5/250 2026-02-28 16:55 by mumin1990
[考研] 0856材料求调剂 +8 hyf hyf hyf 2026-02-28 9/450 2026-02-28 16:27 by etapple
[考研] 285求调剂 +3 满头大汗的学生 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:22 by 无际的草原
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考研] 312求调剂 +4 吃宵夜1 2026-02-28 5/250 2026-02-28 16:11 by gjm133
[考博] 26申博 +3 想申博！ 2026-02-26 3/150 2026-02-28 16:07 by nxgogo
[考研] 295求调剂 +4 19171856320 2026-02-28 4/200 2026-02-28 13:39 by ms629
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 272求调剂 +3 田智友 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:31 by 王加浩to
[基金申请] 什么是人一生最重要的？ +10 瞬息宇宙 2026-02-21 10/500 2026-02-27 08:46 by tfang
[基金申请] 面上可以超过30页吧？ +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[教师之家] 版面费该交吗 +14 苹果在哪里 2026-02-22 17/850 2026-02-26 11:55 by AGI智创机器人
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭