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如何设计引物，扩增目的基因的ORF？
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最近要做基因克隆，扩增基因的ORF 现在已经通过软件找到该基因的CDS和ORF mRNA：23423-24558 CDS：23423-24412 ORF：23423-24412 该基因是没有内含子的基因 我现在要以cDNA为模板 设计引物将此段基因扩增出来 从目前的情况来看，3'端得引物可能比较好设计 因为CDS后还有一段序列 而CDS的5'端前面已经没有其他的序列了 这样的话设计引物就要从第一个核苷酸开始 我用Primer 5看了一下，5‘端根本没有合适的引物 会形成比较稳定的发卡结构 我想问的是，这种情况应该如何解决，应该怎样设计引物将此段扩增出来？ |
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