应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何设计引物，扩增目的基因的ORF？
51/1返回列表
查看: 4529  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

倔强的投手

新虫 (小有名气)

[求助] 如何设计引物，扩增目的基因的ORF？

最近要做基因克隆，扩增基因的ORF
现在已经通过软件找到该基因的CDS和ORF
mRNA：23423-24558
CDS：23423-24412
ORF：23423-24412
该基因是没有内含子的基因
我现在要以cDNA为模板
设计引物将此段基因扩增出来
从目前的情况来看，3'端得引物可能比较好设计
因为CDS后还有一段序列
而CDS的5'端前面已经没有其他的序列了
这样的话设计引物就要从第一个核苷酸开始
我用Primer 5看了一下，5‘端根本没有合适的引物
会形成比较稳定的发卡结构
我想问的是，这种情况应该如何解决，应该怎样设计引物将此段扩增出来？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-26 18:31:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

倔强的投手

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sfb1020 at 2011-06-27 10:21:53:
-3.6影响不大，没有问题。我的引物有时候有-10的也能p出来

哦，不是吧
看来我的确的试试了
这个是不是要用好一点的Taq酶啊？
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-27 10:42:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

倔强的投手(金币+2): 2011-06-27 10:41:03
碰到这种情形你只能从第一个碱基开始了，挑了个稍微好点的，引物形成发卡结构也能P出来的。
赞一下 回复此楼
2楼2011-06-26 20:03:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

倔强的投手

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-26 20:03:26:
碰到这种情形你只能从第一个碱基开始了，挑了个稍微好点的，引物形成发卡结构也能P出来的。

关键形成的发卡结构的G值达到了-3.6，让我非常难办
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-26 20:50:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
倔强的投手(金币+2): 2011-06-27 10:41:11
西瓜(金币+3): 同意！-3.6已经很小了……一般认为-10才需要担心 2011-06-27 17:24:56
引用回帖:
Originally posted by 倔强的投手 at 2011-06-26 20:50:46:
关键形成的发卡结构的G值达到了-3.6，让我非常难办

-3.6影响不大，没有问题。我的引物有时候有-10的也能p出来
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-27 10:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 5/250 2026-08-31 03:29 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 6/300 2026-08-31 02:56 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-31 02:34 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-31 02:13 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-31 01:59 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-31 01:37 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-31 01:26 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-31 00:42 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 能否申诉？ +4 echo8914667 2026-08-30 5/250 2026-08-30 21:11 by echo8914667
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 4/200 2026-08-30 20:40 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:51 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:20 by hZiFeudZyoGR
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭