应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于western blot的一两个实验疑问。
71/1返回列表
查看: 1746  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于western blot的一两个实验疑问。

1.我的二抗是驴抗羊，洗二抗1小时后发现背景还是很深，这时我能把膜再拿回来，重新多洗1小时，再加ecl曝光显色吗？
2.第二个问题是：二抗本来是室温下侧摆摇床孵育2h的，可是别人占用着，这时我放到4度的冰箱的摇床上孵育，得孵育多久？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-11 11:59:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
怎么没人 沉了吗
回复此楼
2楼2011-06-13 17:46:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

火神000

金虫 (小有名气)
也遇到过这样的问题，寻求帮助Ing
赞一下 回复此楼
生活不知眼前的苟且，还有诗和远方
3楼2011-06-14 11:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-06-14 18:23:14
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-06-11 11:59:27:
1.我的二抗是驴抗羊，洗二抗1小时后发现背景还是很深，这时我能把膜再拿回来，重新多洗1小时，再加ecl曝光显色吗？
2.第二个问题是：二抗本来是室温下侧摆摇床孵育2h的，可是别人占用着，这时我放到4度的冰箱的摇 ...

1.背景很黑是不是二抗加多了，可以减少2二抗比例试下。
2,摇床很小吗，为什么不能放一起摇那？放四度到时可以过夜来着，但是觉得室温下摇1-2H就足够了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-14 14:42:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
silicare(金币+1): 第一次听说 2011-06-14 18:23:39
a83875785(金币+1): 2011-06-14 21:34:09
抗羊的二抗天生背景黑，没办法，尽量避免羊的一抗。最好显影后放几个小时，全部淬灭后再重新显影。4度孵育的话几个小时够了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-14 15:07:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jsk10

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-06-14 18:25:10
a83875785(金币+1): 2011-06-14 21:34:14
1、多洗是没用的，抗体已牢牢吸附在膜上了，解决办法是转膜后进行封闭时，封封闭液浓度稍微加大，或延长封闭时间，使封闭更完全；降低二抗浓度或二抗孵育时间。
2、二抗孵育即使在室温下也不需要太长时间的，我们做的话室温或37度30min即可，最多1h，要是4度的话可适当延长时间，2h也是足够可以了。
   以上为本人实验室条件下的情况及参数，希望有帮助。
赞一下(1人) 回复此楼
互相帮助！
6楼2011-06-14 18:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子曰包子好吃

银虫 (小有名气)
你用什么洗的啊  我这里是TBST 3次 每次10min  还有二抗浓度适当降低 封闭时间延长到2-3个小时（我这里是）显影定影时间调整下会有很大改观
赞一下 回复此楼
7楼2011-07-16 10:26:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 a83875785 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +8 yuleib84 2026-08-25 9/450 2026-08-25 15:23 by Weed114114
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 +4 ziyangfang 2026-08-25 6/300 2026-08-25 15:07 by huagongfeihu
[基金申请] 什么时候开奖？ +12 CrisMessi 2026-08-18 13/650 2026-08-25 14:40 by ZJTJZ
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +19 羊腰板 2026-08-21 22/1100 2026-08-25 10:38 by popular289
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭