应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于western blot的一两个实验疑问。
51/1返回列表
查看: 1777  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于western blot的一两个实验疑问。

1.我的二抗是驴抗羊，洗二抗1小时后发现背景还是很深，这时我能把膜再拿回来，重新多洗1小时，再加ecl曝光显色吗？
2.第二个问题是：二抗本来是室温下侧摆摇床孵育2h的，可是别人占用着，这时我放到4度的冰箱的摇床上孵育，得孵育多久？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-11 11:59:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jsk10

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-06-14 18:25:10
a83875785(金币+1): 2011-06-14 21:34:14
1、多洗是没用的，抗体已牢牢吸附在膜上了，解决办法是转膜后进行封闭时，封封闭液浓度稍微加大，或延长封闭时间，使封闭更完全；降低二抗浓度或二抗孵育时间。
2、二抗孵育即使在室温下也不需要太长时间的，我们做的话室温或37度30min即可，最多1h，要是4度的话可适当延长时间，2h也是足够可以了。
   以上为本人实验室条件下的情况及参数，希望有帮助。
赞一下(1人) 回复此楼
互相帮助！
6楼2011-06-14 18:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

火神000

金虫 (小有名气)
也遇到过这样的问题，寻求帮助Ing
赞一下 回复此楼
生活不知眼前的苟且，还有诗和远方
3楼2011-06-14 11:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-06-14 18:23:14
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-06-11 11:59:27:
1.我的二抗是驴抗羊，洗二抗1小时后发现背景还是很深，这时我能把膜再拿回来，重新多洗1小时，再加ecl曝光显色吗？
2.第二个问题是：二抗本来是室温下侧摆摇床孵育2h的，可是别人占用着，这时我放到4度的冰箱的摇 ...

1.背景很黑是不是二抗加多了，可以减少2二抗比例试下。
2,摇床很小吗，为什么不能放一起摇那？放四度到时可以过夜来着，但是觉得室温下摇1-2H就足够了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-14 14:42:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
silicare(金币+1): 第一次听说 2011-06-14 18:23:39
a83875785(金币+1): 2011-06-14 21:34:09
抗羊的二抗天生背景黑，没办法，尽量避免羊的一抗。最好显影后放几个小时，全部淬灭后再重新显影。4度孵育的话几个小时够了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-14 15:07:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 4/200 2026-08-30 20:21 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 19:57 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 19:35 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:23 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-30 19:07 by xiangy672
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 18:18 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 18:07 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 17:47 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 17:34 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:10 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭