24小时热门版块排行榜    

查看: 1742  |  回复: 6

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于western blot的一两个实验疑问。

1.我的二抗是驴抗羊,洗二抗1小时后发现背景还是很深,这时我能把膜再拿回来,重新多洗1小时,再加ecl曝光显色吗?
2.第二个问题是:二抗本来是室温下侧摆摇床孵育2h的,可是别人占用着,这时我放到4度的冰箱的摇床上孵育,得孵育多久?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

怎么没人 沉了吗
2楼2011-06-13 17:46:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

火神000

金虫 (小有名气)

也遇到过这样的问题,寻求帮助Ing
生活不知眼前的苟且,还有诗和远方
3楼2011-06-14 11:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-06-14 18:23:14
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-06-11 11:59:27:
1.我的二抗是驴抗羊,洗二抗1小时后发现背景还是很深,这时我能把膜再拿回来,重新多洗1小时,再加ecl曝光显色吗?
2.第二个问题是:二抗本来是室温下侧摆摇床孵育2h的,可是别人占用着,这时我放到4度的冰箱的摇 ...

1.背景很黑是不是二抗加多了,可以减少2二抗比例试下。
2,摇床很小吗,为什么不能放一起摇那?放四度到时可以过夜来着,但是觉得室温下摇1-2H就足够了。
4楼2011-06-14 14:42:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


silicare(金币+1): 第一次听说 2011-06-14 18:23:39
a83875785(金币+1): 2011-06-14 21:34:09
抗羊的二抗天生背景黑,没办法,尽量避免羊的一抗。最好显影后放几个小时,全部淬灭后再重新显影。4度孵育的话几个小时够了。
5楼2011-06-14 15:07:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jsk10

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-06-14 18:25:10
a83875785(金币+1): 2011-06-14 21:34:14
1、多洗是没用的,抗体已牢牢吸附在膜上了,解决办法是转膜后进行封闭时,封封闭液浓度稍微加大,或延长封闭时间,使封闭更完全;降低二抗浓度或二抗孵育时间。
2、二抗孵育即使在室温下也不需要太长时间的,我们做的话室温或37度30min即可,最多1h,要是4度的话可适当延长时间,2h也是足够可以了。
   以上为本人实验室条件下的情况及参数,希望有帮助。
互相帮助!
6楼2011-06-14 18:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

你用什么洗的啊  我这里是TBST 3次 每次10min  还有二抗浓度适当降低 封闭时间延长到2-3个小时(我这里是)显影定影时间调整下会有很大改观
7楼2011-07-16 10:26:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 a83875785 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +19 羊腰板 2026-08-21 22/1100 2026-08-25 10:38 by popular289
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见