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fengjuanLv铜虫 (初入文坛)
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[求助]
RT-PCR没做出来，求指点
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| 我是做棉花纤维的，提取的RNA质量还行，OD比值在1.8-2.0左右，RNA跑电泳时只有两条带，5s没有（但实验室其他人也是只有两条带）。反转录管家基因的时候只有一部分有RT产物，现在找不出原因，请各位盆友指教一下，在哪些方面可能存在问题。（有RT产物的都是天数很小的幼嫩组织，天数稍大的都没有，但是RNA浓度并不比幼嫩组织小，为什么？）本人真的很着急，感谢大家的帮忙！ |
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yabxxh
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-08 19:02:53
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-08 19:02:53
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从你说的情况来看，RNA应该提取的非常成功，但是不能得到你的目的片段的话有以下几个考虑： 1.你反转录部分出现问题，导致反转录出的cDNA不是很完整，或者说效果不好，无法获得你的目的片段。管家基因并不能说明问题吧，因为一般情况下都很小 2.因为你说幼嫩组织可以获得管家基因，天数稍大的都没有，这说明，很可能你燿的基因只在幼嫩组织中表达，一旦时间过久，就不会有该基因表达。 因此，建议： 1.把你反转录的cDNA跑个电泳就，看是不是很均匀的一个拖尾，而且这个拖尾有没有覆盖到你的目的片段大小 2.再往前取天数更小的幼嫩组织，看会不会获得更好的结果。 好运，欢迎随时反馈交流 |
5楼2011-06-08 14:33:00
2楼2011-06-08 08:51:02
fengjuanLv
铜虫 (初入文坛)
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3楼2011-06-08 10:25:25
4楼2011-06-08 10:59:19
