| 查看: 1552 | 回复: 4 | ||
fengjuanLv铜虫 (初入文坛)
|
[求助]
RT-PCR没做出来，求指点
|
| 我是做棉花纤维的，提取的RNA质量还行，OD比值在1.8-2.0左右，RNA跑电泳时只有两条带，5s没有（但实验室其他人也是只有两条带）。反转录管家基因的时候只有一部分有RT产物，现在找不出原因，请各位盆友指教一下，在哪些方面可能存在问题。（有RT产物的都是天数很小的幼嫩组织，天数稍大的都没有，但是RNA浓度并不比幼嫩组织小，为什么？）本人真的很着急，感谢大家的帮忙！ |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
fengjuanLv» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有120人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求高手指点：RT-PCR的引物设计
已经有18人回复
- 求助！关于RT-PCR的问题！
已经有20人回复
- RT-PCR做成这样 求分析
已经有4人回复
- RNA浓度好低 适合做RT-PCR吗？
已经有7人回复
- 做RT-PCR的战友们，内标定量怎么做？
已经有18人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 做RT-PCR时该用哪段氨基酸序列设计引物
已经有6人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 【求助/交流】做过RT-PCR的请进
已经有12人回复
- 【求助/交流】做培养细胞的RT-PCR，β-actin内参出现两个条带，求原因。
已经有10人回复
- 【求助/交流】有没有人像我这样PCR一会做的出来一会又做不出来的
已经有16人回复
- 谁做过双链RNA的RT-PCR
已经有4人回复
2楼2011-06-08 08:51:02
fengjuanLv
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 151.5
- 帖子: 22
- 在线: 23.1小时
- 虫号: 618106
- 注册: 2008-10-06
- 性别: MM
- 专业: 作物栽培与耕作学
3楼2011-06-08 10:25:25
4楼2011-06-08 10:59:19
yabxxh
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 14
- 应助: 22 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 2238
- 散金: 98
- 红花: 9
- 帖子: 465
- 在线: 88.6小时
- 虫号: 157001
- 注册: 2006-01-05
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-08 19:02:53
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-08 19:02:53
|
从你说的情况来看，RNA应该提取的非常成功，但是不能得到你的目的片段的话有以下几个考虑： 1.你反转录部分出现问题，导致反转录出的cDNA不是很完整，或者说效果不好，无法获得你的目的片段。管家基因并不能说明问题吧，因为一般情况下都很小 2.因为你说幼嫩组织可以获得管家基因，天数稍大的都没有，这说明，很可能你燿的基因只在幼嫩组织中表达，一旦时间过久，就不会有该基因表达。 因此，建议： 1.把你反转录的cDNA跑个电泳就，看是不是很均匀的一个拖尾，而且这个拖尾有没有覆盖到你的目的片段大小 2.再往前取天数更小的幼嫩组织，看会不会获得更好的结果。 好运，欢迎随时反馈交流 |
5楼2011-06-08 14:33:00
