24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)

MolEPI: 14
应助: 22 (小学生)
贵宾: 0.005
金币: 2238
散金: 98
红花: 9
帖子: 465
在线: 88.6小时
虫号: 157001
注册: 2006-01-05
专业: 生物物理、生物化学与分子

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-31 08:15:38
li1977li(金币+1): 2011-05-31 08:37:20

你才试了两个组合就说没有蛋白表达?请问你是怎么判定没有蛋白表达的，sds电泳？是的话你是否分别跑了上清和沉淀？如果都跑了，都没有的话，建议：
1.按照0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2的IPTG浓度分别在30度和37度诱导，诱导时间从1h，2h，3h，4h做梯度，
2.看你的基因是不是表达出毒性蛋白，是的话要选择相应的毒性蛋白表达菌株
3.载体不用换，蛋白表达不是很复杂，但是也不是你想的那么简单，建议多看看《分子克隆第三版》第十五章，希望我没记错。
好运

赞一下(1人)

回复此楼

2楼2011-05-30 22:03:45

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~

大肠杆菌超声破碎参数，求解！！！已经有15人回复
串联表达的问题已经有13人回复
大肠杆菌培养及破碎已经有11人回复
蛋白酶基因表达，用的Bacillus subtilis系统，但总是表达不出，求高人指点…… 已经有19人回复
膜蛋白表达问题已经有15人回复
测序的问题已经有24人回复
镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教已经有18人回复
蛋白纯化，纠结已经有6人回复
【求助/交流】做过膜蛋白表达的看过来已经有12人回复
【求助/交流】离子交换纯化原核表达蛋白已经有15人回复
【专题】蛋白新纯化思路探讨已经有26人回复
【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带已经有41人回复

点击这里搜索更多相关资源

科研从小木虫开始，人人为我，我为人人

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

MolEPI: 14
应助: 24 (小学生)
贵宾: 1.2
金币: 113951
散金: 1526
红花: 224
沙发: 1
帖子: 28917
在线: 3664.3小时
虫号: 464575
注册: 2007-11-21
性别: GG
专业: 神经生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-31 08:15:49

首先先发表一个不同于楼上的看法：蛋白表达虽操作不复杂，但绝对不简单，每个蛋白都是一个个例。

我们组的一个蛋白做了数百个截短，不同的载体，宿主。大肠、酵母、昆虫等表达系统都试了，N多人投入，N多钱投入，两年了，连可溶性表达都没有获得。

浓度及时间什么的基本可以不试，每次试诱导16、25、37三个温度，都用0.1mM IPTG，没有表达的话基本上就可以不用筛这两个条件了。再筛也不会有什么表达。

不知道你的蛋白含不含稀有密码子，但是我建议你还是多换几个载体，宿主。果断点，别犹豫。换个GST标签的，C端His tag的，BL21试过了么？

毒性不毒性的就不用太在意了，如果毒性能够抑制的话，你能转化成功都是个问题。我碰到过一个双突变的例子，怎么转怎么不长，最后在葡萄糖培养基上长出来的。

赞一下(1人)

回复此楼

The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.

3楼2011-05-31 00:42:50

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 li1977li 的主题更新

返回列表