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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达 难
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yanfeier

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达 难

最近在忙一段基因的表达，但是连到PET-32a上面，就是不表达，不知道具体的原因出在什么地方？37度  IPTG终浓度1mM   过夜诱导，请各位帮帮找找原因
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1楼 2011-05-29 10:26:07
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gagalady

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

yanfeier(金币+1): 2011-05-30 09:13:31
想知道你想表达的这段基因的来处 什么基因呀
也许换换表达菌
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2楼2011-05-29 10:48:51
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
dhd997(金币+4): 是啊 2011-05-29 12:26:25
yanfeier(金币+2): 2011-05-30 09:13:38
1：诱导温度有没有试试？
2：诱导剂浓度呢？
3：如果前两者做过了，那么你的引物设计是否有问题？
4：实在不行，换载体吧、
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-29 11:51:30
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sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 可以试试 2011-05-29 13:48:17
yanfeier(金币+1): 2011-05-30 09:13:46
你要表达的蛋白可能对表达菌有毒性，可以换个表达菌试试
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4楼2011-05-29 13:29:51
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lly198784

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
yanfeier(金币+2): 2011-05-30 09:19:51
dhd997(金币+2): 有道理 2011-05-30 12:46:34
表达载体针对你的宿主菌是表达的吗？有文献报道吗？诱导剂加入的时间及诱导剂浓度以及诱导时间很重要的哦！
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5楼2011-05-29 15:48:56
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yangbin1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-30 08:29:21
我也遇到过这种情况，把所有条件都试过了，就是不表达。引物什么的都没有问题。最后是换载体解决的。换完GST标签的质粒，表达量就很好了。建议你换个GST标签的载体，可能结果会有所改变。不要再换PET系列的了。
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6楼2011-05-29 23:40:03
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IMB2009

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-30 08:29:33
诱导后低温 大概20度试试
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7楼2011-05-30 00:18:10
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-30 08:29:44
连接前后酶切验证了吗？关键是测序验证了吗？如果发生了移码或突变就麻烦了！
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8楼2011-05-30 00:30:23
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yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-29 11:51:30:
1：诱导温度有没有试试？
2：诱导剂浓度呢？
3：如果前两者做过了，那么你的引物设计是否有问题？
4：实在不行，换载体吧、

是不是在37度诱导肯定可以表达呀 ？
你所说的引物设计的问题指的是什么？
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9楼2011-05-30 09:11:37
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yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yguang at 2011-05-30 00:30:23:
连接前后酶切验证了吗？关键是测序验证了吗？如果发生了移码或突变就麻烦了！

你说的这些都没有错误
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10楼2011-05-30 09:12:16
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