应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达 难
181/2返回列表12下一页
查看: 1287  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

yanfeier

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达 难

最近在忙一段基因的表达，但是连到PET-32a上面，就是不表达，不知道具体的原因出在什么地方？37度  IPTG终浓度1mM   过夜诱导，请各位帮帮找找原因
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-29 10:26:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gagalady

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

yanfeier(金币+1): 2011-05-30 09:13:31
想知道你想表达的这段基因的来处 什么基因呀
也许换换表达菌
赞一下 回复此楼
2楼2011-05-29 10:48:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
dhd997(金币+4): 是啊 2011-05-29 12:26:25
yanfeier(金币+2): 2011-05-30 09:13:38
1：诱导温度有没有试试？
2：诱导剂浓度呢？
3：如果前两者做过了，那么你的引物设计是否有问题？
4：实在不行，换载体吧、
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-29 11:51:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 可以试试 2011-05-29 13:48:17
yanfeier(金币+1): 2011-05-30 09:13:46
你要表达的蛋白可能对表达菌有毒性，可以换个表达菌试试
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-29 13:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lly198784

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
yanfeier(金币+2): 2011-05-30 09:19:51
dhd997(金币+2): 有道理 2011-05-30 12:46:34
表达载体针对你的宿主菌是表达的吗？有文献报道吗？诱导剂加入的时间及诱导剂浓度以及诱导时间很重要的哦！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-05-29 15:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangbin1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-30 08:29:21
我也遇到过这种情况，把所有条件都试过了，就是不表达。引物什么的都没有问题。最后是换载体解决的。换完GST标签的质粒，表达量就很好了。建议你换个GST标签的载体，可能结果会有所改变。不要再换PET系列的了。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-05-29 23:40:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

IMB2009

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-30 08:29:33
诱导后低温 大概20度试试
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-05-30 00:18:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-30 08:29:44
连接前后酶切验证了吗？关键是测序验证了吗？如果发生了移码或突变就麻烦了！
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-05-30 00:30:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-29 11:51:30:
1：诱导温度有没有试试？
2：诱导剂浓度呢？
3：如果前两者做过了，那么你的引物设计是否有问题？
4：实在不行，换载体吧、

是不是在37度诱导肯定可以表达呀 ？
你所说的引物设计的问题指的是什么？
赞一下 回复此楼
9楼2011-05-30 09:11:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yguang at 2011-05-30 00:30:23:
连接前后酶切验证了吗？关键是测序验证了吗？如果发生了移码或突变就麻烦了！

你说的这些都没有错误
赞一下 回复此楼
10楼2011-05-30 09:12:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yanfeier 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +6 349506619 2026-08-28 6/300 2026-08-31 08:43 by kingkocxr
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭