应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 没有polyA怎么逆转录？
71/1返回列表
查看: 2442  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

biofeixue

木虫 (著名写手)

[求助] 没有polyA怎么逆转录？

我最近查了一些基因，想看看他们受环境的影响是表达多了还是少了？
结果发现这些基因的3端都没有polyA尾巴，为什么？另外如果没有polyA尾巴，我怎么逆转录？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-27 09:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
biofeixue(金币+5): 2011-05-27 09:30:18
西瓜(金币+5, EPI+1): 一般试剂盒都配有随机引物（一般是random 6 mers）和Oligo dT，楼主用随机引物做反转录就可以了。也可以自己设计基因特异的引物来反转录，跟PCR引物差不多。推荐前者。 2011-05-27 12:56:37
...，基因的话，按照其结构应该是有polyA的，可能你找的是编码区吧。
没有polya的话你可以用随机引物，或者你自己的特定引物来反转录啊
好运
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-27 09:29:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

西瓜: 有poly A可以用Oligo dT作为反转录的引物啦。 2011-05-27 12:58:14
biofeixue(金币+2): 2011-05-28 15:03:38
你的实验目的，依我看polyA根本没意义，你就做反转录就是了，需要定量就用RT-realtime PCR
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-05-27 12:30:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-05-27 19:27:06
biofeixue(金币+3): 2011-05-28 15:03:56
biofeixue(金币+1): 2011-06-07 08:17:55
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2011-05-27 12:30:56:
你的实验目的，依我看polyA根本没意义，你就做反转录就是了，需要定量就用RT-realtime PCR

没有polyA就不用oligo dT，这个实验他的目的就是想看该基因的表达，那么不用oligo dT最好，因为oligo dT是非特异性的，用来做所有mRNA的反转录有用，用来做特异基因的哪有什么意义
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-27 13:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

biofeixue(金币+2): 2011-05-28 15:04:09
biofeixue(金币+1): 2011-06-07 08:18:01
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2011-05-27 13:58:39:
没有polyA就不用oligo dT，这个实验他的目的就是想看该基因的表达，那么不用oligo dT最好，因为oligo dT是非特异性的，用来做所有mRNA的反转录有用，用来做特异基因的哪有什么意义

我说的是引物，直接设计特异引物，比用oligo dT好多了
赞一下 回复此楼
5楼2011-05-27 13:59:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
dhd997(金币+2): 热心鼓励一下 2011-05-27 19:27:26
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2011-05-27 13:59:29:
我说的是引物，直接设计特异引物，比用oligo dT好多了

定量用的荧光定量PCR是用特异引物的，所以一般可以反转录出总的cDNA，这样子一份cDNA样品可以检测多个基因。定量时除了扩展目的基因，还需扩增actin、tublin等内参基因，作为样品量的校正。
如果在反转录时就用特异引物，那就浪费反转录酶啦。然后内参怎么做呢？
用特异性引物作反转录我是听说过，不过自己没做过，也许有些方面用特异性引物更好。请指教哦
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-05-27 14:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yj507

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

biofeixue(金币+5): 2011-05-28 15:04:50
biofeixue(金币+1): 2011-06-07 08:18:06
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2011-05-27 13:58:39:
没有polyA就不用oligo dT，这个实验他的目的就是想看该基因的表达，那么不用oligo dT最好，因为oligo dT是非特异性的，用来做所有mRNA的反转录有用，用来做特异基因的哪有什么意义

顶起~
提取RNA后，直接设计该基因的特异引物和看家基因引物做RT，然后QPCR定量就可以比较表达量的差异了。oligodT或N6是对所有polyA或转录本逆转，对于这个实验更麻烦。
赞一下 回复此楼
7楼2011-05-27 17:12:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 biofeixue 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +10 土豆er? 2026-04-09 10/500 2026-04-09 10:54 by 静花儿
[考研] 化学工程调剂289 +32 yang婷 2026-04-07 33/1650 2026-04-09 10:18 by wp06
[考研] 085600，321分求调剂 +18 大馋小子 2026-04-04 19/950 2026-04-09 10:07 by 猪会飞
[考研] 280求调剂 +9 李rien 2026-04-04 9/450 2026-04-08 13:20 by lijunpoly
[考研] 材料工程专业日语生求调剂 +9 111623 2026-04-07 9/450 2026-04-07 23:31 by 一只好果子?
[考研] 313求调剂 +3 十六拾陆 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:20 by lbsjt
[考研] 一志愿南科大生物学297分，求调剂推荐 +8 Y-yyusx 2026-04-06 9/450 2026-04-07 19:38 by biomichael
[考研] 信工所11408 340分 本科西安交大自动化 +3 moontrek 2026-04-06 3/150 2026-04-07 09:56 by chongya
[考研] 319分085702安全工程求调剂 +6 rious 2026-04-05 6/300 2026-04-07 09:42 by jp9609
[考研] 材料调剂 +6 一样YWY 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:30 by 南航~万老师
[考研] 348求调剂 +6 wukira 2026-04-04 6/300 2026-04-05 18:11 by 猪会飞
[考研] 284求调剂 +7 徐同学_001 2026-04-04 13/650 2026-04-05 17:19 by yulian1987
[考研] 考研生物学考A区211，初试322，科目生化和生物综合，求调剂 +6 。。。54 2026-04-03 6/300 2026-04-05 14:54 by JOKER0401
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 材料科学与工程考研 +10 拯救皮特托先生 2026-04-02 10/500 2026-04-03 23:57 by userper
[考研] 335求调剂 +7 沈清璃 2026-04-03 7/350 2026-04-03 18:55 by lijunpoly
[考研] 0705理学294求调剂 +3 成果成果cg5 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:04 by simons1972
[考研] 求调剂 +3 心想事成可 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:22 by wangjy2002
[考研] 296求调剂 +4 sdhu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:29 by baoball
[考研] 求调剂 302分初试 0854 +5 伶可乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 17:53 by 笔落锦州
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭