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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR非特异性扩增
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)

[求助] PCR非特异性扩增

最近做PCR，非特异性扩增较明显，求助怎么样提高目的条带的扩增效率，减少非特异性条带扩增，谢谢
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在这个纷绕的世俗世界里，能够学会用一颗平常的心去对待周围的一切，也是一种境界。
1楼 2011-05-18 14:08:09
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-05-18 22:10:54
xuqingchun33(金币+1): 一直都存在非特异性条带 2011-05-19 16:26:48
引用回帖:
Originally posted by xuqingchun33 at 2011-05-18 14:08:09:
最近做PCR，非特异性扩增较明显，求助怎么样提高目的条带的扩增效率，减少非特异性条带扩增，谢谢

你是指同一引物原来扩增很好，最近变差还是一直都存在非特异性条带，考虑的因素：
1.引物设计
2. 扩增温度，可以做个梯度PCR看看。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-18 21:03:32
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zwlr116812

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励下，欢迎常来 2011-05-19 13:52:37
xuqingchun33(金币+3): 谢谢 2011-05-19 16:27:57
silicare(EPI+1): 2011-05-19 21:30:20
1.重新设计引物
2.减低体系中引物的用量
3.增加模板的量
4.降低循环次数
  
祝实验顺利
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-05-19 08:15:19
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by zhengfan1109 at 2011-05-18 21:03:32:
你是指同一引物原来扩增很好，最近变差还是一直都存在非特异性条带，考虑的因素：
1.引物设计
2. 扩增温度，可以做个梯度PCR看看。

那就从2楼和3楼提出的建议入手，祝实验顺利！
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4楼2011-05-19 18:56:59
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apheyh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议使用NCBI 引物设计，因为可以使用后台数据库进行比对，应该可以有效降低非特性产物的问题；设计完成后 再使用oligo 进行分析。
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5楼2011-05-19 19:09:13
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xuqingchun33(金币+1): 我们实验室用的是天根的taq mix和pfu mix 2011-05-20 10:20:25
一个好的PCR酶也是很重要的，最近深有体会。
建议用高保真的Taq酶，
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6楼2011-05-19 21:20:35
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
建议用invitrogen的或者novagen的吧
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7楼2011-05-20 20:53:27
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