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catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长

[求助] PCR程序设计的问题

目标片段900多bp,引物1Tm值66.72,引物2Tm值65.52,请问用什么样的PCR程序好?
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

catmihzh(金币+5): 谢谢 2011-05-13 19:05:41
引用回帖:
Originally posted by catmihzh at 2011-05-13 15:56:23:
上次我设了55-66度,结果也没有

你两条引物TM值都挺高的,按照我给你说的设置梯度P一下看看,应该没有什么问题的。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
9楼2011-05-13 16:22:26
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3, EPI+1): good 2011-05-13 13:40:25
1:首先做一个温度梯度(退火温度)看看哪一个温度下P出来的条带最亮,TM1+TM2/2=66.12,可以设置如下梯度:60 62 64 66 68 ;

2:延伸1:30,25个循环就可以,因为你只是看一下哪一个温度下最亮,所以循环数25个循环足矣。

貌似我都给你做了。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-05-13 12:21:32
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gagalady

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1949stone(EPI+1): 可行 2011-05-13 15:40:51
cycle1:94° 3min
cycle2:94° 30sec  60° 30sec 72° 70sec   30个循环
cycle3:72° 10min
cycle4: 4° ∞
3楼2011-05-13 12:37:52
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catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-13 12:21:32:
1:首先做一个温度梯度(退火温度)看看哪一个温度下P出来的条带最亮,TM1+TM2/2=66.12,可以设置如下梯度:60 62 64 66 68 ;

2:延伸1:30,25个循环就可以,因为你只是看一下哪一个温度下最亮,所以循环数25个 ...

昨天我63度作了一次,结果只有marker的条带
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4楼2011-05-13 12:53:22
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